OSI-027

目录号：S2624 批次号：S262404

化学数据

	别名	ASP4786, CERC 006, AEVI-006	储存条件 (自收到货起)	3年 / -20°C / 粉状 1年 / -80°C / 溶于溶剂
	化学式	C₂₁H₂₂N₆O₃
	分子量	406.44	CAS号	936890-98-1
Solubility (25°C)*	体外	DMSO	81 mg/mL (199.29 mM)
		Water	Insoluble
		Ethanol	Insoluble
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble. * Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

制备储备液

生物活性

产品描述

OSI-027 (ASP4786, CERC 006, AEVI-006)是一种选择性的有效的双重mTORC1和mTORC2抑制剂，无细胞试验中IC50分别为22 nM 和 65 nM，作用于mTOR的选择性比作用于PI3Kα，PI3Kβ，PI3Kγ或 DNA-PK高100多倍。OSI-027可诱导癌细胞的自噬。

靶点

mTOR ^[4] (Cell-free assay)	mTORC1 ^[1] (Cell-free assay)	mTORC2 ^[1] (Cell-free assay)	PI3Kγ ^[4] (Cell-free assay)
4 nM	22 nM	65 nM	0.42 μM

体外研究

OSI-027对mTORC1和mTORC2表现出选择性且ATP竞争性抑制活性，IC50分别为22 nM 和 65 nM。此外，OSI-027抑制磷酸-4E-BP的mTOR信号，细胞试验中IC50 为1 μM。^[1] OSI-027对几种衍生自骨髓/巨核细胞的急性白血病细胞系，包括U937，KG-1，KBM-3B，ML-1，HL-60，和MEG-01细胞表现出剂量依赖性抗增殖活性。^[2]最近的一项研究表明，OSI-027对mTORC1/2的抑制有效抑制乳腺癌细胞中Akt (S473)磷酸化和细胞增殖。^[3]

体内研究

在GEO结肠直肠异种移植物中，OSI-027 (65 mg/kg)抑制mTORC1和mTORC2效应器，包括4E-BP1，Akt，和S6磷酸化。此外，OSI-027同时抑制mTORC1和mTORC2，且对mTORC1的抑制比rapamycin更有效。^[1]

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验	生化检测
激酶实验	mTORC1和mTORC2的抑制使用HeLa裂解物中免疫沉淀的天然酶复合物在1 mM ATP下进行测定。为制备HeLa细胞的全细胞裂解物，25 g细胞聚合体在60 mL 冰预冷的缓冲液A [40 mM HEPES (pH 7.5)，120 mM NaCl，1 mM EDTA，10 mM焦磷酸钠，10 mM 甘油磷酸盐，50 mM NaF，0.5 mM 原矾酸盐，和包含0.3% CHAPS的EDTA游离的蛋白酶抑制剂]中在冷藏室的磁力搅拌器上裂解30分钟。通过13,000 g离心分离10分钟清除裂解物，蛋白质G包被的384孔板与0.25 μg mTOR抗体在15 μL缓冲液A中于4℃下培养1小时。每孔中加入包含40 μg HeLa细胞裂解物的15 μL缓冲液A，在4 °C下培养过夜以免疫沉淀mTOR复合物。板用缓冲液A清洗3遍，用免疫沉淀洗涤缓冲液[缓冲液B: 50 mM HEPES (pH 7.5) 和150 mM NaCl]清洗2遍。OSI-027以10 μM浓度加入每孔中，对照孔加入DMSO。在100 μM ATP存在或不存在下，通过将150 ng His-标记的4E-BP1作为底物加入每孔中25 μL新鲜制备的激酶缓冲液[缓冲液C: 20 mM HEPES (pH 7.5)，10 mM MgCl₂，4 mM MnCl₂，10 mM β-巯基乙醇，和200 μM 矾酸盐]起始反应，并在室温(RT)下培育30分钟。从每孔中转移25 μL反应混合物到新鲜Ni-螯合物涂覆的平板的相应孔中，并在4 °C下培养过夜，随后在37 °C下培养2小时。为检测4E-BP1的磷酸化作用，平板用包含5%脱脂奶粉的TBST (包含0.1%Tween-20的Tris缓冲盐水)洗涤一次。每孔中加入25 μL磷酸-4E-BP1 抗体与包含5%脱脂奶粉的TBST 1:1,000的稀释物，并在RT下培育1小时。将板用TBST洗涤一次，然后加入25 μL抗兔子HRP (以1:10,000稀释) 的TBST(包含5%脱脂奶粉)。板在RT下培育1小时，然后用TBST洗涤5次。对于磷酸-4E-BP1的检测，加入25 μL化学发光试剂A+B，化学发光使用Analyst酶标仪测量。
细胞实验	细胞系	U937，KG-1，KBM-3B，ML-1，HL-60，和 MEG-01
	浓度	0-10 μM
	处理时间	72小时
	方法	增殖的抑制使用Cell Titer Glo试验测量，如图例中所示。为生成剂量响应曲线，细胞系以5,000细胞每孔的密度接种于96孔板。接种24小时后，细胞给药不同浓度的OSI-027 或rapamycin。Cell Titer Glo试验信号在给药72小时后测定，并归一化为载体处理的对照组。增殖的抑制，表示为相对于载体处理对照组的分数，并使用PRISM软件生成图表。
动物实验	动物模型	GEO 结肠癌细胞皮下注射到nu/nu CD-1小鼠的右侧腹部。
	剂量	≤65 mg/kg
	给药处理	强饲

参考文献

[4] Bhagwat SV, et al. Mol Cancer Ther. 2011, 10(8), 1394-1406.

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客户使用selleck产品的实验数据

: 数据来源于[, 1078-1439(13)00251-2]

: 数据来源于[Data independently produced by , , Br J Cancer, 2016, 114(6):650-8]

: 数据来源于[Data independently produced by , , Cell Physiol Biochem, 2018, 46(2):676-686]

: 数据来源于[Data independently produced by , , Sci Rep, 2016, 6:28945]

OSI-027在文献中得到引用

Three generations of mTOR kinase inhibitors in the activation of the apoptosis process in melanoma cells [ J Cell Commun Signal, 2023, 17(3):975-989]	PubMed: 37097377
hnRNP C modulates MERS-CoV and SARS-CoV-2 replication by governing the expression of a subset of circRNAs and cognitive mRNAs [ Emerg Microbes Infect, 2022, 11(1):519-531]	PubMed: 35060842
Combined inhibition of BET bromodomain and mTORC1/2 provides therapeutic advantage for rhabdomyosarcoma by switching cell death mechanism [ Mol Carcinog, 2022, 10.1002/mc.23414]	PubMed: 35472745
Minimal mitochondrial respiration is required to prevent cell death by inhibition of mTOR signaling in CoQ-deficient cells [ Cell Death Discov, 2021, 7(1):201]	PubMed: 34349107
Dual Inhibition of mTORC1/2 Reduces Migration of Cholangiocarcinoma Cells by Regulation of Matrixmetalloproteinases [ Front Cell Dev Biol, 2021, 9:785979]	PubMed: 35096817
Mitochondrial Genome-Derived circRNA mc-COX2 Functions as an Oncogene in Chronic Lymphocytic Leukemia [ Mol Ther Nucleic Acids, 2020, 1;20:801-811]	PubMed: 32438315
Combined mTORC1/mTORC2 inhibition blocks growth and induces catastrophic macropinocytosis in cancer cells. [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2019, 10.1073/pnas.1911393116]	PubMed: 31732667
Reverting chemoresistance of targeted agents by a ultrasoluble dendritic nanocapsule. [ J Control Release, 2019, 317:67-77]	PubMed: 31756395
Targeting mTOR suppressed colon cancer growth through 4EBP1/eIF4E/PUMA pathway. [ Cancer Gene Ther, 2019, 10.1038/s41417-019-0117-7]	PubMed: 31257364
Targeting mTORC1/2 with OSI-027 inhibits proliferation and migration of keloid keratinocytes [ Exp Dermatol, 2019, 28(3):270-275]	PubMed: 30650200

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