NVP-BSK805 2HCl

目录号：S2686 批次号：S268603

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化学数据

化学结构式 别名 BSK805 储存条件
(自收到货起)		 3年 / -20°C / 粉状
1年 / -80°C / 溶于溶剂
化学式

C27H28F2N6O.2HCl
分子量 563.47 CAS号 1942919-79-0
Solubility (25°C)* 体外 DMSO 100 mg/mL (177.47 mM)
Water 100 mg/mL (177.47 mM)
Ethanol 6 mg/mL (10.64 mM)
体内（现配现用）
澄清溶液
30%PEG400 0.5%Tween80 5%propylene glycol
30mg/ml (53.24mM) 以 1 mL 工作液为例，取300μL100mg/ml的澄清PEG400储备液加到5μLTween80中，混合均匀使其澄清；向上述体系中加入50μL Propylene glycol，混合均匀使其澄清；然后继续加入645μL ddH2O定容至 1 mL。工作液请现配现用！
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

制备储备液

生物活性

产品描述 NVP-BSK805 2HCl是一种有效的，选择性的，ATP竞争性的JAK2抑制剂，IC50为0.5 nM，比作用于JAK1， JAK3和TYK2选择性高20倍以上。
靶点
JAK2 [1]
(Cell-free assay)		 TYK2 [1]
(Cell-free assay)		 JAK3 [1]
(Cell-free assay)		 JAK1 [1]
(Cell-free assay)
~0.5 nM 10.76 nM 18.68 nM 31.63 nM
体外研究 NVP-BSK805是JAK2强有效的抑制剂，且对JAK2的特异性很好，其对JAK2的抑制效果比对JAK1, JAK3和TYK2要强20倍。0.5 nM 的NVP-BSK805对全长JAK2V617F和野生型JAK2酶产生一半的最大抑制效果。NVP-BSK805阻断JAK2V617F细胞(Ba/F3)的生长，且诱导细胞凋亡，其GI50在＜100 nM的浓度。STAT5磷酸化作用是依赖JAK2的基本的磷酸化作用，在JAK2 V617F突变的细胞中，大于等于100 nM的 NVP-BSK805像MB-02一样能显著抑制STAT5的磷酸化作用。分别用150 nM和1µM的NVP-BSK805孵育SET-2细胞，分别能抑制75%和95%的细胞生长，且在这两个浓度下培养24, 48和72小时，发现会引起浓度和时间依赖的细胞凋亡。可以检测裂开的PARP、Bcl-xL表达的减少和急剧增加的DNA含量少于2N的细胞数量，通过检测这些确定结果。[1] NVP-BSK805引起的细胞凋亡是需要通过激活凋亡蛋白级联反应来实现的，而当在SET-2和MB-02细胞中抑制细胞凋亡蛋白酶caspase则可以抑制这种NVP-BSK805引起的细胞凋亡。在JAK2V617F细胞, SET-2和MB-02细胞中，NVP-BSK805能调节Bim的翻译后修饰和Mcl-1的水平。[2]
体内研究 口服NVP-BSK805生物药的利用效率在小鼠体内的实验估计为45%，在大鼠实验中估计为50%。给携带Ba/F3 JAK2V617F细胞的小鼠模型口服150 mg/kg的NVP-BSK805能抑制STAT5的磷酸化，脾肿大及白血病细胞的扩散。给BALB/c小鼠口服25, 50和100 mg/kg剂量的NVP-BSK805，能抑制rhEpo诱导的STAT5磷酸化反应和rhEpo调节的红细胞增多和脾肿大。[1]

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验 酶活性分析
构建含有人的JAK2激酶结构域（840-1132位氨基酸）的质粒pAcG2TtevJAK2。分别设计构建了JAK3 (813-1124), TYK2 (888-1187)和JAK1(866-1154)的质粒。通过产品手册(BD Biosciences Pharmingen)构建含有BD BaculoGoldTM Bright线性DNA的融合杆状病毒，空斑实验以及单一斑块病毒扩增实验。用100 mL加了青霉素/链霉素(Sigma)的 ExCell420培养基(JRH Biosciences Ltd)在27 ℃培养Sf9细胞48小时，用于表达Janus激酶结构域。在悬浮培养的细胞浓度在1 × 106时进行感染，用感染病毒后可溶性蛋白的产量优化每个病毒的感染复数(MOI)。分别在MOI为1和0.5的时候表达人的JAK2的激酶结构域和JAK1, JAK3和TYK2的激酶结构域。27 ℃下培养48小时表达JAK2，而JAK1, JAK3和TYK2则需48或72小时表达。感染后48小时或72小时后，将100 mL表达培养基用3000 ×g离心5分钟收集细胞，用12 mL裂解缓冲液裂解细胞，缓冲液成分为50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 1 mM原钒酸钠, 1 % Triton X-100, 10 % 甘油, 1× 不含EDTA的完全蛋白酶抑制剂混合物(Roche Diagnostics)和12.5 U/mL Benzonase。4℃孵育30分钟，14,000 × g离心45分钟分离颗粒性不可溶物质。然后在4 ℃下用GST标签亲和纯化蛋白激酶结构域。将之前离心所得的上清与0.2 mL含有50 %的谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B的悬浮液在4 ℃下孵育2小时，然后用1 mL含有50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1 % Triton X-100, 1 mM DTT和10 %甘油的缓冲液洗5次。用0.25 mL的洗脱缓冲液(50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1 % Triton X-100, 1mM DTT, 10 % 甘油, 10 mM还原性L-谷胱甘肽)洗脱结合到胶上的蛋白，分5次洗脱，每次孵育10分钟。用Amicon Ultra-4离心超滤管浓缩洗脱液到五分之一的体积。加入终浓度0.1 %的Brij35后，将蛋白分成小份，置于-80℃速冻保存，在这种储存条件下其激酶活性能保持至少6个月。在含有0.1 μM [γ33P]-ATP, 1 mM MnCl2, 5 mM MgCl2, 30 μM合成的多肽底物EQEDEPEGDYFEWLE, 1 mM DTT, 1 % DMSO, 50 μg/mL BSA, 0.01 % Brij35和50 mM Tris-HCl pH 7.5的缓冲体系中加入JAK激酶结构域作为酶，室温孵育30分钟。对于所有的蛋白ATP的浓度都低于其Km值。用XLfit® (型号205)的逻辑斯谛方程和全局拟合功能对曲线进行非线性回归拟合。像激酶实验的条件一样全长野生型JAK2及其突变体V617F的表达及鉴定，实验方法在其他地方已经介绍了。用内源激酶通路分析NVP-BSK805的激酶选择性实验，在Caliper实验中，在电场中当多肽底物被磷酸化后会有不同的迁移速度，以此来检测激酶实验。多肽带有荧光标签，可以在毛细管系统中用于检测、离子交换及定量。用LC3000仪器(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA)对多肽的荧光进行定量。激酶实验中激酶的活性可以通过检测剩余的ATP的数量来定量。LanthaScreenTM TR-FRET激酶实验中，铽元素当做镧系元素螯合物融合了抗磷酸化底物的抗体。
细胞实验 细胞系 Ba/F3细胞
浓度 100 nM
处理时间 72小时
方法 可以通过比色分析试剂盒WST-1 (Roche Diagnostics GmbH)来检测细胞存活率，用于分析对比用8点浓度范围的药物培养72小时后细胞的存活情况以及用DMSO处理细胞后产生相关的细胞增殖变化情况，这样可以检测JAK2抑制剂抑制细胞增殖的能力。重复三次后，计算平均值，XLfit 4 软件绘图，可以得到抑制最大生长一半(GI50)的数值。
动物实验 动物模型 RhEpo诱导的红血球增多症的雌性BALB/c小鼠
剂量 50, 75和100 mg/kg
给药处理 每天口服一次

客户使用selleck产品的实验数据

数据来源于[Data independently produced by PLoS One, 2013, 8(5), e63301]

, Dr. Catherine Rolvering and Dr. Claude Haan of Université du Luxembour

数据来源于[Data independently produced by , , J Biol Chem, 2015, 290(39):23553-62]

NVP-BSK805 2HCl在文献中得到引用

JAK2 Inhibitor, Fedratinib, Inhibits P-gp Activity and Co-Treatment Induces Cytotoxicity in Antimitotic Drug-Treated P-gp Overexpressing Resistant KBV20C Cancer Cells [ Int J Mol Sci, 2022, 23(9)4597] PubMed: 35562984
Establishment and characterization of immortalized sweat gland myoepithelial cells [ Sci Rep, 2022, 12(1):7] PubMed: 34997030
Interleukin 6 trans-signaling is a critical driver of lung allograft fibrosis [ Am J Transplant, 2021, 21(7):2360-2371] PubMed: 33249747
CXCL10/CXCR3 signaling contributes to an inflammatory microenvironment and its blockade enhances progression of murine pancreatic precancerous lesions [ Elife, 2021, 10e60646] PubMed: 34328416
IL-6 derived from therapy-induced senescence facilitates the glycolytic phenotype in glioblastoma cells [ Am J Cancer Res, 2021, 11(2):458-478] PubMed: 33575081
A Single-Cell Landscape of High-Grade Serous Ovarian Cancer [ Nat Med, 2020, 10.1038/s41591-020-0926-0] PubMed: 32572264
Revisiting Aldehyde Oxidase Mediated Metabolism in Drug-like Molecules: An Improved Computational Model [ J Med Chem, 2020, 31] PubMed: 32191458
Stomatin-like Protein 2 Promotes Tumor Cell Survival by Activating the JAK2-STAT3-PIM1 Pathway, Suggesting a Novel Therapy in CRC. [ Mol Ther Oncolytics, 2020, 30;17:169-179] PubMed: 32346607
STAT3/5 Inhibitors Suppress Proliferation in Bladder Cancer and Enhance Oncolytic Adenovirus Therapy. [ Int J Mol Sci, 2020, 21(3)] PubMed: 32046095
A novel human colon signet-ring cell carcinoma organoid line: establishment, characterization and application [ Carcinogenesis, 2020, 41(7):993-1004] PubMed: 31740922

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