PHA-767491 HCl

目录号：S2742 批次号：S274201

化学数据

	别名	CAY10572, NMS 1116354	储存条件 (自收到货起)	3年 / -20°C / 粉状 1年 / -80°C / 溶于溶剂
	化学式	C₁₂H₁₁N₃O.HCl
	分子量	249.7	CAS号	942425-68-5
Solubility (25°C)*	体外	DMSO	24 mg/mL (96.11 mM)
		Water	Insoluble
		Ethanol	Insoluble
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble. * Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

制备储备液

生物活性

产品描述

PHA-767491 (CAY10572, NMS 1116354) HCl是一种有效的，ATP竞争性的，双重Cdc7/CDK9抑制剂，无细胞试验中IC50分别为10 nM和34 nM，比作用于CDK1/2和GSK3-β选择性高20倍左右，比作用于MK2和CDK5选择性高50倍，比作用于PLK1和CHK2选择性高100倍。

靶点

Cdc7 ^[1] (Cell-free assay)	CDK9 ^[1] (Cell-free assay)	GSK-3β ^[1] (Cell-free assay)	CDK2 ^[1] (Cell-free assay)	CDK1 ^[1] (Cell-free assay)	View More
10 nM	34 nM	220 nM	240 nM	250 nM	View More

体外研究

PHA-767491 20倍选择性作用于Cdk1, Cdk2 和 GSK3-β,50倍选择性作用于MK2和Cdk5，100倍选择性作用于 PLK1 和 CHK2。PHA-767491 抑制多种人类细胞系增殖，IC50为从作用于SF-268 细胞的0.86 μM 到作用于K562细胞的5.87 μM, 且按p53非依赖方式几乎显著诱导所有细胞凋亡，而5-FU 或Gemcitabine 只作用于一小部分细胞系。不同于现在的DNA合成抑制剂，5 μM PHA-767491 阻断 DNA 复制开始而不是复制叉的进展，归因于Cdc7 激酶和Mcm2 在Cdc7依赖性Ser40 位点的磷酸化受特定抑制。^[1] 3 μM PHA-767491 处理抗ABT-737的 OCI-LY1 和 SU-DHL-4 细胞，显著降低上调的Mcl-1水平，可能因为 Cdk9受抑制, 导致对ABT-737的敏感性恢复。^[2] 1 μM PHA-767491作用于静态慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞，可观察到直接线粒体依赖性的促凋亡效果，EC50为0.34-0.97 μM。5 μM PHA-767491 处理 CD154 和IL-4刺激的增殖CLL细胞，通过抑制Cdc7而不是触发细胞死亡而废除DNA合成。^[3]

体内研究

PHA-767491 每天处理两次，持续5天，显著抑制HL60移植瘤生长，这种作用存在剂量依赖性，按20 mg/kg 和30 mg/kg剂量处理，TGI分别为50% 和92%,这种效果在A2780, Mx-1, 和 HCT-116移植瘤模型和 DMBA诱导的乳腺癌中也很显著, 与Cdc7受抑制相关，随后降低Mcm2在Cdc7依赖性Ser40 位点的磷酸化。^[1]

特征

PHA-767491是第一个通过控制 DNA 复制起始而不是延伸阶段而影响机制的抑制剂。

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验	体外激酶实验
激酶实验	使用强阴离子交换实验测定PHA-767491 (IC50)抑制Cdc7 和 Cdk9的情况。对于每种酶，初步确定ATP的绝对K_m值和特定底物，然后在最佳 ATP/³³Pγ-ATP 混合物(2K_m) 和底物 (5K_m) 浓度进行每组实验。在含 50 mM Hepes pH 7.9, 15 mM MgCl₂,2 mM β-甘油磷酸, 0.2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄,2K_mATP/³³Pγ-ATP 混合物, 5K_m Mcm2 (aa 10-294), 37 nM 重组Cdc7/Dbf4，和浓度不断增高PHA-767491的buffer中进行 Cdc7激酶实验，终体积为 30 μL, 在 25^oC下温育1小时。使用 50 nM 重组 Cdk9/cyclin T 在 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄, 2K_m ATP/³³Pγ-ATP 混合物, 5K_m RNA聚合酶CDT 肽，和浓度不断增高PHA-767491的buffer中进行Cdk9激酶反应，终体积为30 μL,在 25^oC下温育1小时。温育后，加入150 μL 树脂/甲酸盐 (pH 3.0)，终止反应，捕获未反应的³³Pγ-ATP, 使其与溶液中磷酸化礼物分离。1小时后，50 μL上清液转移到Optiplate 96 孔板上。加入 150 μL Microscint 40后，在TopCount上计算放射性。
细胞实验	细胞系	HeLa, MCF7, HCT-116, U2OS, A2780, K562, SF-539, SF-268, Ovcar8, SW480, COLO205, HCT-15, Jurkat, PC3, 和 NHDF
	浓度	溶于DMSO,终浓度为~ 20 μM
	处理时间	24 或72 小时
	方法	使用 PHA-767491处理细胞24 或 72小时。裂解细胞，使用耐高温萤火虫荧光素酶实验测定孔中ATP含量，用来衡量存活细胞数。通过含特定促发光底物的荧光素酶实验，测量 caspase-3 和 caspase-7的活化，衡量实验组和对照组的比率。通过流式细胞仪测量DNA复制，衡量核苷酸类似物BrdU渗透进DNA的量。
动物实验	动物模型	皮下移植 HL60细胞的雌性SCID小鼠,皮下移植 HCT116细胞,A2780 或Mx-1细胞的雄性Hsd，无胸腺nu-nu 小鼠,和携带DMBA诱导的乳腺癌的雌性Sprague-Dawley大鼠
	剂量	~50 mg/kg
	给药处理	静脉注射或口服处理，每天两次。

参考文献

客户使用selleck产品的实验数据

: , Leukemia, 2015, 29(8):1702-12.

PHA-767491 HCl在文献中得到引用

ATR limits Rad18-mediated PCNA monoubiquitination to preserve replication fork and telomerase-independent telomere stability [ EMBO J, 2024, 43(7):1301-1324]	PubMed: 38467834
K6-linked ubiquitylation marks formaldehyde-induced RNA-protein crosslinks for resolution [ Mol Cell, 2023, 10.1016/j.molcel.2023.10.011]	PubMed: 37951215
ATR protects ongoing and newly assembled DNA replication forks through distinct mechanisms [ Cell Rep, 2023, 42(7):112792]	PubMed: 37454295
The nucleolar protein GNL3 prevents resection of stalled replication forks [ EMBO Rep, 2023, 24(12):e57585]	PubMed: 37965896
Systematic screening identifies ABCG2 as critical factor underlying synergy of kinase inhibitors with transcriptional CDK inhibitors [ Breast Cancer Res, 2023, 25(1):51]	PubMed: 37147730
A function for ataxia telangiectasia and Rad3-related (ATR-kinase in cytokinetic abscission. [ iScience, 2023, 25(7)]	PubMed: None
The balance between ATR and DDK activities controls TopBP1-mediated locking of dormant origins at the pre-IC stage [ bioRxiv, 2023, 10.1101/2023.11.29.569233]	PubMed: none
Thymidine rescues ATR kinase inhibitor-induced deoxyuridine contamination in genomic DNA, cell death, and interferon-α/β expression [ Cell Rep, 2022, 40(12):111371]	PubMed: 36130512
A function for ataxia telangiectasia and Rad3-related (ATR) kinase in cytokinetic abscission [ iScience, 2022, 25(7):104536]	PubMed: 35754741
Human DDK rescues stalled forks and counteracts checkpoint inhibition at unfired origins to complete DNA replication [ Mol Cell, 2021, 81(3):426-441.e8]	PubMed: 33545059

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