PHA-767491 HCl
别名: CAY10572, NMS 1116354
PHA-767491 (CAY10572, NMS 1116354) HCl是一种有效的，ATP竞争性的，双重Cdc7/CDK9抑制剂，无细胞试验中IC50分别为10 nM和34 nM，比作用于CDK1/2和GSK3-β选择性高20倍左右，比作用于MK2和CDK5选择性高50倍，比作用于PLK1和CHK2选择性高100倍。
PHA-767491 HCl Chemical Structure
CAS: 942425-68-5
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产品质控
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CDK抑制剂选择性比较
细胞实验数据示例
| 细胞系 | 实验类型 | 给药浓度 | 孵育时间 | 活性描述 | 文献信息 |
|---|---|---|---|---|---|
| human HeLa cells | Function assay | 5 μM | 24 h | Induction of apoptosis in human HeLa cells assessed as appearance of PARP at 5 uM after 24 hrs | 18469809 |
| NHDF | Function assay | 5 μM | 16 h | Induction of cell cycle arrest in thymidine deficient NHDF assessed as DNA synthesis in S-phase at 5 uM after 16hrs FACS analysis in presence of serum | 18469809 |
| human SF268 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against p53 deficient human SF268 cells after 72 hrs, IC50=0.86 μM | 18469809 | |
| human HCT116 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human HCT116 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=0.97 μM | 18469809 | |
| human HCT16 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human HCT16 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1 μM | 19115845 | |
| human SW403 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human SW403 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1 μM | 19115845 | |
| human A2780 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human A2780 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.07 μM | 18469809 | |
| human SW48 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human SW48 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.2 μM | 19115845 | |
| human MCF7 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human MCF7 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.3 μM | 19115845 | |
| human U2OS cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human U2OS cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.49 μM | 18469809 | |
| human COLO205 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human COLO205 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.5 μM | 19115845 | |
| human OVCAR8 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against p53 deficient human OVCAR8 cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.56 μM | 18469809 | |
| human L363 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human L363 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.6 μM | 19115845 | |
| human NHDF cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human NHDF cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.6 μM | 19115845 | |
| human NCI-H929 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human NCI-H929 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.8 μM | 19115845 | |
| human SF539 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human SF539 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=2.34 μM | 18469809 | |
| human SW480 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against p53 deficient human SW480 cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=2.67 μM | 18469809 | |
| human Jurkat cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against p53 deficient human Jurkat cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=3.2 μM | 18469809 | |
| human HCT15 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human HCT15 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=3.81 μM | 18469809 | |
| human OPM2 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human OPM2 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=4.5 μM | 19115845 | |
| human HT-29 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against human HT-29 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=5 μM | 19115845 | |
| human K562 cells | Proliferation assay | 72 h | Antiproliferative activity against p53 deficient human K562 cells after 72 hrs, IC50=5.87 μM | 18469809 | |
| human NCI60 cells | Proliferation assay | Antiproliferative activity against human NCI60 cells, IC50=3.1 μM | 18469809 | ||
| U937 cells | Function assay | Inhibition of TNFalpha production in U937 cells, IC50=19 μM | 17480064 | ||
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生物活性
| 产品描述 | PHA-767491 (CAY10572, NMS 1116354) HCl是一种有效的，ATP竞争性的，双重Cdc7/CDK9抑制剂，无细胞试验中IC50分别为10 nM和34 nM，比作用于CDK1/2和GSK3-β选择性高20倍左右，比作用于MK2和CDK5选择性高50倍，比作用于PLK1和CHK2选择性高100倍。 | |||||||||||
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| 特性 | PHA-767491是第一个通过控制 DNA 复制起始而不是延伸阶段而影响机制的抑制剂。 | |||||||||||
| 靶点 |
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| 体外研究(In Vitro) | ||||
| 体外研究活性 | PHA-767491 20倍选择性作用于Cdk1, Cdk2 和 GSK3-β,50倍选择性作用于MK2和Cdk5，100倍选择性作用于 PLK1 和 CHK2。PHA-767491 抑制多种人类细胞系增殖，IC50为从作用于SF-268 细胞的0.86 μM 到 作用于K562细胞的5.87 μM, 且按p53非依赖方式几乎显著诱导所有细胞凋亡，而5-FU 或Gemcitabine 只作用于一小部分细胞系。不同于现在的DNA合成抑制剂，5 μM PHA-767491 阻断 DNA 复制开始而不是复制叉的进展，归因于Cdc7 激酶和Mcm2 在Cdc7依赖性Ser40 位点的磷酸化受特定抑制。[1] 3 μM PHA-767491 处理抗ABT-737的 OCI-LY1 和 SU-DHL-4 细胞，显著降低上调的Mcl-1水平，可能因为 Cdk9受抑制, 导致对ABT-737的敏感性恢复。[2] 1 μM PHA-767491作用于静态慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞，可观察到直接线粒体依赖性的促凋亡效果，EC50为0.34-0.97 μM。5 μM PHA-767491 处理 CD154 和IL-4刺激的增殖CLL细胞，通过抑制Cdc7而不是触发细胞死亡而废除DNA合成。[3] |
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|---|---|---|---|---|
| 激酶实验 | 体外激酶实验 | |||
| 使用强阴离子交换实验测定PHA-767491 (IC50)抑制Cdc7 和 Cdk9的情况。对于每种酶，初步确定ATP的绝对Km值和特定底物，然后在最佳 ATP/33Pγ-ATP 混合物(2Km) 和底物 (5Km) 浓度进行每组实验。在含 50 mM Hepes pH 7.9, 15 mM MgCl2,2 mM β-甘油磷酸, 0.2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4,2KmATP/33Pγ-ATP 混合物, 5Km Mcm2 (aa 10-294), 37 nM 重组Cdc7/Dbf4，和浓度不断增高PHA-767491的buffer中进行 Cdc7激酶实验，终体积为 30 μL, 在 25oC下温育1小时。使用 50 nM 重组 Cdk9/cyclin T 在 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 2Km ATP/33Pγ-ATP 混合物, 5Km RNA聚合酶CDT 肽，和浓度不断增高PHA-767491的buffer中进行Cdk9激酶反应，终体积为30 μL,在 25oC下温育1小时。温育后，加入150 μL 树脂/甲酸盐 (pH 3.0)，终止反应，捕获未反应的33Pγ-ATP, 使其与溶液中磷酸化礼物分离。1小时后，50 μL上清液转移到Optiplate 96 孔板上。加入 150 μL Microscint 40后，在TopCount上计算放射性。 | ||||
| 细胞实验 | 细胞系 | HeLa, MCF7, HCT-116, U2OS, A2780, K562, SF-539, SF-268, Ovcar8, SW480, COLO205, HCT-15, Jurkat, PC3, 和 NHDF | ||
| 浓度 | 溶于DMSO,终浓度为~ 20 μM | |||
| 孵育时间 | 24 或72 小时 | |||
| 方法 | 使用 PHA-767491处理细胞24 或 72小时。裂解细胞，使用耐高温萤火虫荧光素酶实验测定孔中ATP含量，用来衡量存活细胞数。通过含特定促发光底物的荧光素酶实验，测量 caspase-3 和 caspase-7的活化，衡量实验组和对照组的比率。通过流式细胞仪测量DNA复制，衡量核苷酸类似物BrdU渗透进DNA的量。 |
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| 实验图片 | 检测方法 | 检测指标 | 实验图片 | PMID |
| Western blot | p-MCM2 / CDC7 RNA Pol II / p-RNA Pol II / Caspase-3 / PARP / Mcl-1 / XIAP / Bcl-xL / Bcl-2 / NOXA |
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24902048 | |
| 体内研究(In Vivo) | ||
| 体内研究活性 |
PHA-767491 每天处理两次，持续5天，显著抑制HL60移植瘤生长，这种作用存在剂量依赖性，按20 mg/kg 和30 mg/kg剂量处理，TGI分别为50% 和92%,这种效果在A2780, Mx-1, 和 HCT-116移植瘤模型和 DMBA诱导的乳腺癌中也很显著, 与Cdc7受抑制相关，随后降低Mcm2在Cdc7依赖性Ser40 位点的磷酸化。[1] |
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|---|---|---|
| 动物实验 | Animal Models | 皮下移植 HL60细胞的雌性SCID小鼠,皮下移植 HCT116细胞,A2780 或Mx-1细胞的雄性Hsd，无胸腺nu-nu 小鼠,和携带DMBA诱导的乳腺癌的雌性Sprague-Dawley大鼠 |
| Dosages | ~50 mg/kg | |
| Administration | 静脉注射或口服处理，每天两次。 | |
化学信息&溶解度
| 分子量 | 249.7 | 分子式 | C12H11N3O.HCl |
| CAS号 | 942425-68-5 | SDF | Download PHA-767491 HCl SDF |
| Smiles | C1CNC(=O)C2=C1NC(=C2)C3=CC=NC=C3.Cl | ||
| 储存条件(自收到货起) | |||
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体外溶解度 |
DMSO : 24 mg/mL ( (96.11 mM)； DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO) Water : Insoluble Ethanol : Insoluble |
摩尔浓度计算器 |
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体内溶解度 现配现用，请按从左到右的顺序依次添加，澄清后再加入下一溶剂 |
动物体内配方计算器 | ||||
实验计算
动物体内配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方）
计算结果：
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于μL DMSO溶液（母液浓度mg/mL，注：如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请先联系Selleck）；
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入μL ddH2O，混匀澄清。
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混匀澄清。
注意：1. 首先保证母液是澄清的；
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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