Purmorphamine
别名: Shh Signaling Antagonist VI
Purmorphamine (Shh Signaling Antagonist VI)直接结合并激活Smoothened，阻断BODIPY-cyclopamine与Smo结合，在HEK293T细胞中IC50约为1.5 μM，也诱导成骨细胞分化，EC50为1μM。Purmorphamine 可减少基础和诱导的自噬。
Purmorphamine Chemical Structure
CAS: 483367-10-8
客户使用Selleck的Purmorphamine发表文献54篇
产品质控
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Hedgehog/Smoothened抑制剂选择性比较
细胞实验数据示例
| 细胞系 | 实验类型 | 给药浓度 | 孵育时间 | 活性描述 | 文献信息 |
|---|---|---|---|---|---|
| HEK293T | Function assay | 5 uM | 4 hrs | Inhibition of BODIPY-cyclopamine binding to Smo N-terminal cysteine domain expressed in HEK293T cells at 5 uM after 4 hrs by fluorescence microscopy | 16408088 |
| HEK293T | Function assay | 5 uM | 4 hrs | Inhibition of BODIPY-cyclopamine binding to Smo C-terminal cytoplasmic domain expressed in HEK293T cells at 5 uM after 4 hrs by fluorescence microscopy | 16408088 |
| Shh Light2 | Function assay | 30 hrs | Activation of Shh in mouse Shh Light2 cells after 30 hrs by luciferase reporter gene assay, EC50 = 1 μM. | 16408088 | |
| C3H10T1/2 | Function assay | 6 days | Activity at Smo in mouse C3H10T1/2 cells assessed as induction of cell differentiation into osteoblast incubated for 6 days by alkaline phosphatase assay, EC50 = 0.8 μM. | 27429255 | |
| HEK293T | Function assay | 1 hr | Inhibition of BODIPY-cyclopamine binding to Smo expressed in HEK293T cells after 1 hr by fluorescence microscopy, IC50 = 1.5 μM. | 16408088 | |
| Shh Light2 | Function assay | 30 hrs | Activation of Shh in mouse Shh Light2 cells assessed as beta-galactosidase activity after 30 hrs by luciferase reporter gene assay in presence of 100 nM 3-keto-N-aminoethyl-N'-aminocaproyldihydrocinnamoyl cyclopamine | 16408088 | |
| C3H10T1/2 | Function assay | Induction of osteogenesis in mouse C3H10T1/2 cells assessed as induction of osteoblast specific marker alkaline phosphatase by immunofluorescence method, EC50 = 1 μM. | 16408003 | ||
| SK-N-MC | qHTS assay | qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-MC cells | 29435139 | ||
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生物活性
| 产品描述 | Purmorphamine (Shh Signaling Antagonist VI)直接结合并激活Smoothened，阻断BODIPY-cyclopamine与Smo结合，在HEK293T细胞中IC50约为1.5 μM，也诱导成骨细胞分化，EC50为1μM。Purmorphamine 可减少基础和诱导的自噬。 | ||
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| 靶点 |
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| 体外研究(In Vitro) | ||||
| 体外研究活性 | Purmorphamine与Cyclopamine（一种Smo拮抗剂）竞争，直接结合和激活Smoothened，而激活Hedgehog通路，IC50为1.5 μM。[1] Purmorphamine作用于全能C3H10T1/2 细胞，是有效的骨生成诱导剂。Purmorphamine作用于C3H10T1/2细胞的EC50(根据ALP表达) 为1 μM。Purmorphamine (1 μM) 和BMP-4 (100 ng/mL)联用，作用于3T3-L1细胞，使ALP活性增强90多倍。[2] 与BMP-4相比, Purmorphamine作用于多能间充质祖细胞，诱导骨生成，通过激活Hedgehog信号。[3] |
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|---|---|---|---|---|
| 激酶实验 | 结合实验 | |||
| 使用BODIPY-Cyclopamine和过表达Smo的细胞进行Smo结合实验，使用CMV启动子, 含SV40起点的表达载体，获得Smo-Myc3，缺失突变体Smo CRD (68到182位氨基酸缺失), 和Smo CT (556到793位氨基酸缺失)。HEK 293T细胞在12孔板中的聚-D-赖氨酸处理的玻璃盖玻片上生长，直到70％汇合，然后使用FuGene 6，通过适当的表达载体(每孔0.5g)进行转染。转染两天后，HEK 293T细胞与含0.5％小牛血清，5 nM BODIPY-Cyclopamine，和不同浓度的Purmorphamine (0, 1.5, 或5 M) (每孔1 mL)的 DMEM培养基在37°C下温育1小时。然后使用1×PBS缓冲液（每孔1 mL）洗涤过表达Smo的细胞，置于含DAPI的培养基，使用Leica DM4500B荧光显微镜观察。使用固定细胞进行结合检测，使用溶于1×PBS缓冲液（每孔1 mL）的3％多聚甲醛在室温下固定过表达Smo的HEK293T细胞10分钟，然后使用含10mM甘氨酸和0.2％叠氮化钠的1×PBS缓冲液（每孔1 mL）处理5分钟，使用1×PBS缓冲液（每孔1 mL）洗涤，然后再使用含Purmorphamine的培养基在室温下处理4小时。 | ||||
| 细胞实验 | 细胞系 | C3H10T1/2 细胞 | ||
| 浓度 | 0.5-10 μM | |||
| 孵育时间 | 4 天 | |||
| 方法 | C3H10T1/2细胞在T175烧瓶中扩增，第13通道的细胞通过胰蛋白酶/EDTA分离，然后在生长培养基中稀释。使用Multi-dropTM液体传输系统，将产生的细胞悬浮液按每孔2500个细胞接种到黑色透明底384孔板中，孔中为100 µL生长培养基。温育过夜后，细胞附着到孔的底部。使用Mini TrakTM多位分配系统，将溶于DMSO (500 nL)的每组Purmorphamine储存液输送到对应孔中，确保Purmorphamine终浓度为5μM。然后细胞置于37°C下含5% CO2的空气中温育。4天后，除去培养基，10 μL被动裂解缓冲液加入到每孔中。5分钟后，10 μL碱性磷酸酶底物溶液添加到每孔中。在室温下温育15分钟后，在Acquest高通量酶标仪上对实验板进行读数。 |
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| 实验图片 | 检测方法 | 检测指标 | 实验图片 | PMID |
| Western blot | Patch1 / Gli1 / LC3 / p62 |
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26609469 | |
| Immunofluorescence | SOX18 |
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26588701 | |
| Growth inhibition assay | Cell viability |
|
26588701 | |
| 体内研究(In Vivo) | ||
| 体内研究活性 |
Purmorphamine作用于基于大鼠结构的人间充质干细胞，上调ALP表达。[4] |
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|---|---|---|
化学信息&溶解度
| 分子量 | 520.62 | 分子式 | C31H32N6O2 |
| CAS号 | 483367-10-8 | SDF | Download Purmorphamine SDF |
| Smiles | C1CCC(CC1)N2C=NC3=C(N=C(N=C32)OC4=CC=CC5=CC=CC=C54)NC6=CC=C(C=C6)N7CCOCC7 | ||
| 储存条件(自收到货起) | |||
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体外溶解度 |
DMSO : 4 mg/mL ( (7.68 mM)； DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO) Water : Insoluble Ethanol : Insoluble |
摩尔浓度计算器 |
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体内溶解度 现配现用，请按从左到右的顺序依次添加，澄清后再加入下一溶剂 |
动物体内配方计算器 | ||||
实验计算
动物体内配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方）
计算结果：
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于μL DMSO溶液（母液浓度mg/mL，注：如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请先联系Selleck）；
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入μL ddH2O，混匀澄清。
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混匀澄清。
注意：1. 首先保证母液是澄清的；
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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