Renilla Luciferase Antibody [G15A23]

目录号: F3466

抗体应用：反应性：Renilla reniformis

Lane 1: 293T (transfected with an empty vector), Lane 2: 293T (transfected with Renilla Luciferase expression vector)

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例
WB1:10000 IF1:1000 FCM1:70

抗体应用
WB, IF, FCM

反应性
Renilla reniformis

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量实际分子量
36 kDa 36 kDa
^*为什么预测分子量和实际分子量会有不同？以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Renilla Luciferase Antibody [G15A23] 可检测外源性 Renilla Luciferase 总蛋白水平。

克隆号
G15A23

别名
Coelenterazine h 2-monooxygenase, Renilla-luciferin 2-monooxygenase, Renilla-type luciferase

背景
海肾荧光素酶是一种来自海肾（Renilla reniformis）的腔肠素依赖性氧化还原酶，它在分子氧存在下催化腔肠素的氧化脱羧反应，生成腔肠酰胺、二氧化碳和一个电子激发态产物。该激发态产物的弛豫过程会发出蓝光，为生化和细胞分析提供了一种灵敏的生物发光读数方法。该酶具有α/β-水解酶样折叠结构，在进化上与卤代烷脱卤酶相关。然而，其活性位点已被改造为单加氧酶中心，包含一个催化三联体。在该催化三联体中，Asp120、Glu144和His285，以及其他残基（如Asn53、Trp121和Pro220）共同作用，使腔肠素处于合适的位置，从而进行氧化、二氧杂环丁酮中间体的形成以及随后的脱羧反应。这表明，水解酶骨架的细微修饰如何能够支持脱羧加氧酶反应。腔肠素与活性位点的氧气结合会生成一个短寿命的氢过氧化物和二氧杂环丁酮中间体，该中间体的分解会释放能量，形成激发态单线态腔肠酰胺单阴离子，该单阴离子会发射波长约为480 nm的光；在天然生物体中，该能量通过Förster共振能量转移传递给相邻的绿色荧光蛋白，使发射光谱红移至绿色并增强光子输出；而在重组报告基因应用中，通常直接测量其固有的蓝色发射。在海肾发光器中，荧光素酶与一种受Ca²⁺调控的荧光素结合蛋白（该蛋白在受到刺激时释放腔肠素）以及海肾GFP受体协同作用，形成一个具有明确动力学和光谱特性的紧密有序的生物发光系统。海肾荧光素酶基因的克隆和优化变体的开发使得其无需翻译后修饰即可实现稳定的异源表达。该酶严格依赖于腔肠素且不消耗ATP，这使其在机制上与萤火虫荧光素酶截然不同，从而可以构建双报告基因检测系统。在双报告基因检测中，海肾荧光素酶作为内参，而萤火虫荧光素酶则用于报告通路特异性的转录活性。这些特性支持海肾荧光素酶作为定量报告基因广泛应用于基因调控研究、GPCR和激酶通路分析、RNA干扰和CRISPR筛选、基于BRET/FRET技术的蛋白质-蛋白质相互作用分析以及体内成像。在体内成像中，工程化嵌合体和红移变体能够提高亮度并增强组织穿透力，从而实现对活体动物信号传导和基因表达的非侵入性检测。

背景

海肾荧光素酶是一种来自海肾（Renilla reniformis）的腔肠素依赖性氧化还原酶，它在分子氧存在下催化腔肠素的氧化脱羧反应，生成腔肠酰胺、二氧化碳和一个电子激发态产物。该激发态产物的弛豫过程会发出蓝光，为生化和细胞分析提供了一种灵敏的生物发光读数方法。该酶具有α/β-水解酶样折叠结构，在进化上与卤代烷脱卤酶相关。然而，其活性位点已被改造为单加氧酶中心，包含一个催化三联体。在该催化三联体中，Asp120、Glu144和His285，以及其他残基（如Asn53、Trp121和Pro220）共同作用，使腔肠素处于合适的位置，从而进行氧化、二氧杂环丁酮中间体的形成以及随后的脱羧反应。这表明，水解酶骨架的细微修饰如何能够支持脱羧加氧酶反应。腔肠素与活性位点的氧气结合会生成一个短寿命的氢过氧化物和二氧杂环丁酮中间体，该中间体的分解会释放能量，形成激发态单线态腔肠酰胺单阴离子，该单阴离子会发射波长约为480 nm的光；在天然生物体中，该能量通过Förster共振能量转移传递给相邻的绿色荧光蛋白，使发射光谱红移至绿色并增强光子输出；而在重组报告基因应用中，通常直接测量其固有的蓝色发射。在海肾发光器中，荧光素酶与一种受Ca²⁺调控的荧光素结合蛋白（该蛋白在受到刺激时释放腔肠素）以及海肾GFP受体协同作用，形成一个具有明确动力学和光谱特性的紧密有序的生物发光系统。海肾荧光素酶基因的克隆和优化变体的开发使得其无需翻译后修饰即可实现稳定的异源表达。该酶严格依赖于腔肠素且不消耗ATP，这使其在机制上与萤火虫荧光素酶截然不同，从而可以构建双报告基因检测系统。在双报告基因检测中，海肾荧光素酶作为内参，而萤火虫荧光素酶则用于报告通路特异性的转录活性。这些特性支持海肾荧光素酶作为定量报告基因广泛应用于基因调控研究、GPCR和激酶通路分析、RNA干扰和CRISPR筛选、基于BRET/FRET技术的蛋白质-蛋白质相互作用分析以及体内成像。在体内成像中，工程化嵌合体和红移变体能够提高亮度并增强组织穿透力，从而实现对活体动物信号传导和基因表达的非侵入性检测。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19788887/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18359861/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%