Renilla Luciferase Antibody [G15A23]

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生物描述

特异性 Renilla Luciferase Antibody [G15A23] 可检测外源性 Renilla Luciferase 总蛋白水平。
背景 海肾荧光素酶是一种来自海肾（Renilla reniformis）的腔肠素依赖性氧化还原酶，它在分子氧存在下催化腔肠素的氧化脱羧反应，生成腔肠酰胺、二氧化碳和一个电子激发态产物。该激发态产物的弛豫过程会发出蓝光，为生化和细胞分析提供了一种灵敏的生物发光读数方法。该酶具有α/β-水解酶样折叠结构，在进化上与卤代烷脱卤酶相关。然而，其活性位点已被改造为单加氧酶中心，包含一个催化三联体。在该催化三联体中，Asp120、Glu144和His285，以及其他残基（如Asn53、Trp121和Pro220）共同作用，使腔肠素处于合适的位置，从而进行氧化、二氧杂环丁酮中间体的形成以及随后的脱羧反应。这表明，水解酶骨架的细微修饰如何能够支持脱羧加氧酶反应。腔肠素与活性位点的氧气结合会生成一个短寿命的氢过氧化物和二氧杂环丁酮中间体，该中间体的分解会释放能量，形成激发态单线态腔肠酰胺单阴离子，该单阴离子会发射波长约为480 nm的光；在天然生物体中，该能量通过Förster共振能量转移传递给相邻的绿色荧光蛋白，使发射光谱红移至绿色并增强光子输出；而在重组报告基因应用中，通常直接测量其固有的蓝色发射。在海肾发光器中，荧光素酶与一种受Ca²⁺调控的荧光素结合蛋白（该蛋白在受到刺激时释放腔肠素）以及海肾GFP受体协同作用，形成一个具有明确动力学和光谱特性的紧密有序的生物发光系统。海肾荧光素酶基因的克隆和优化变体的开发使得其无需翻译后修饰即可实现稳定的异源表达。该酶严格依赖于腔肠素且不消耗ATP，这使其在机制上与萤火虫荧光素酶截然不同，从而可以构建双报告基因检测系统。在双报告基因检测中，海肾荧光素酶作为内参，而萤火虫荧光素酶则用于报告通路特异性的转录活性。这些特性支持海肾荧光素酶作为定量报告基因广泛应用于基因调控研究、GPCR和激酶通路分析、RNA干扰和CRISPR筛选、基于BRET/FRET技术的蛋白质-蛋白质相互作用分析以及体内成像。在体内成像中，工程化嵌合体和红移变体能够提高亮度并增强组织穿透力，从而实现对活体动物信号传导和基因表达的非侵入性检测。

使用信息

抗体应用 WB, IF, FCM 稀释比例
WB IF FCM
1:10000 1:1000 1:70
反应性 Renilla reniformis
抗体类型 Rabbit Monoclonal Antibody MW 36 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Application Data

WB

Validated by Selleck

  • Lane 1: 293T (transfected with an empty vector), Lane 2: 293T (transfected with Renilla Luciferase expression vector)