SirT7 Antibody [K23K24] Datasheet

生物描述

特异性	SirT7 Antibody [K23K24] 可检测内源性总 SIRT7 的蛋白水平。
背景	sirtuins 是一种 NAD⁺ 依赖性脱乙酰酶，其失调已被确定为各种严重人类疾病（包括糖尿病、神经系统疾病、心血管疾病和癌症）发生和发展的主要因素。哺乳动物中的 sirtuins 家族由七个成员（SIRT1-SIRT7）组成，它们共享一个保守的催化域，但在 N 端和 C 端区域存在显著差异。sirtuins 主要被认为是调控许多生物过程的关键脱乙酰酶，例如细胞增殖、存活、基因组稳定性和代谢。它们通过表观遗传调控基因表达和染色质重塑来实现这一点，要么直接去乙酰化特定的组蛋白残基，要么调控其他组蛋白修饰酶。SIRT7 在哺乳动物 sirtuins 中是独一无二的，因为它主要定位在核仁中，核仁是参与核糖体生物合成的重要细胞器。在核仁内，SIRT7 与SIRT1 通过保留这些位点的异染色质结构来维持正常细胞中沉默核糖体 DNA (rDNA) 基因的稳定性。这一作用可防止重复 rDNA 序列的同源重组，从而防止整体基因组不稳定性，这是维持基因组完整性和防止细胞转化和衰老的关键策略。SIRT7 被序列特异性转录因子（如 Elk-4）招募到染色质中，在那里它使基因启动子上赖氨酸 18 (H3K18) 的组蛋白 H3 脱乙酰化，从而导致转录抑制。值得注意的是，SIRT7 的过度表达会导致 H3K18 乙酰化的整体减少，这种变化与前列腺癌、肺癌、肾癌和胰腺癌等癌症的不良预后有关。此外，SIRT7 对于 E1A 介导的 H3K18 乙酰化降低至关重要，可促进细胞周期进入并使细胞绕过接触抑制。

特异性

SirT7 Antibody [K23K24] 可检测内源性总 SIRT7 的蛋白水平。

背景

sirtuins 是一种 NAD⁺ 依赖性脱乙酰酶，其失调已被确定为各种严重人类疾病（包括糖尿病、神经系统疾病、心血管疾病和癌症）发生和发展的主要因素。哺乳动物中的 sirtuins 家族由七个成员（SIRT1-SIRT7）组成，它们共享一个保守的催化域，但在 N 端和 C 端区域存在显著差异。sirtuins 主要被认为是调控许多生物过程的关键脱乙酰酶，例如细胞增殖、存活、基因组稳定性和代谢。它们通过表观遗传调控基因表达和染色质重塑来实现这一点，要么直接去乙酰化特定的组蛋白残基，要么调控其他组蛋白修饰酶。SIRT7 在哺乳动物 sirtuins 中是独一无二的，因为它主要定位在核仁中，核仁是参与核糖体生物合成的重要细胞器。在核仁内，SIRT7 与SIRT1 通过保留这些位点的异染色质结构来维持正常细胞中沉默核糖体 DNA (rDNA) 基因的稳定性。这一作用可防止重复 rDNA 序列的同源重组，从而防止整体基因组不稳定性，这是维持基因组完整性和防止细胞转化和衰老的关键策略。SIRT7 被序列特异性转录因子（如 Elk-4）招募到染色质中，在那里它使基因启动子上赖氨酸 18 (H3K18) 的组蛋白 H3 脱乙酰化，从而导致转录抑制。值得注意的是，SIRT7 的过度表达会导致 H3K18 乙酰化的整体减少，这种变化与前列腺癌、肺癌、肾癌和胰腺癌等癌症的不良预后有关。此外，SIRT7 对于 E1A 介导的 H3K18 乙酰化降低至关重要，可促进细胞周期进入并使细胞绕过接触抑制。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1:1000	1:200

反应性

Human, Mouse, Rat, Monkey

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

45 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃

储存条件
(自收到货起)

–20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声破碎，冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声破碎，冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Lanni A, et al. Oncogene. 2024 Mar;43(14):993-1006.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: 293
Lane 2: COS7