KU-0063794

目录号：S1226 批次号：S122603

化学数据

	别名	N/A	储存条件 (自收到货起)	3年 / -20°C / 粉状 1年 / -80°C / 溶于溶剂
	化学式	C₂₅H₃₁N₅O₄
	分子量	465.54	CAS号	938440-64-3
Solubility (25°C)*	体外	DMSO	16 mg/mL (34.36 mM)
		Water	Insoluble
		Ethanol	Insoluble
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble. * Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

制备储备液

生物活性

产品描述

KU-0063794是一种有效的，高度特异性的，作用于mTORC1和mTORC2的双重mTOR抑制剂，在无细胞试验中IC50约为~10 nM；对PI3Ks没有作用。

靶点

mTORC1 ^[1] (Cell-free assay)	mTORC2 ^[1] (Cell-free assay)
~10 nM	~10 nM

体外研究

与mTOR抑制剂PP242相比, KU-0063794高特异性作用于mTOR,而对PI3Ks或其他76种激酶则无作用活性。30 nM KU-0063794作用于HEK-293细胞，通过抑制疏水基团(Thr³⁸⁹)磷酸化，及随后的T-环残基(Thr²²⁹) 磷酸化，而快速切除S6K1活性。300 nM KU-0063794作用于IGF1刺激的血清饥饿处理的 HEK-293细胞，抑制~90%S6K1活性。KU-0063794 为 100-300 nM时，也完全抑制氨基酸诱导的S6K1和 S6蛋白磷酸化。与S6K1类似, KU-0063794抑制mTORC1在 Ser²⁴⁴⁸位点磷酸化，也抑制mTORC2 在 Ser2²⁴⁸¹ 位点磷酸化，这种作用存在剂量和时间依赖性。在血清存在时，或者IGF1刺激的情况下, KU-0063794抑制Akt 活性，或者Akt在 Ser⁴⁷³和 Thr³⁰⁸（意外的）位点磷酸化，也抑制Akt底物 PRAS40 在 Thr²⁴⁶位点，GSK3α/GSK3β在 Ser²¹/Ser⁹位点及Foxo-1/3a 在 Thr²⁴/Thr³²位点磷酸化，以上作用存在剂量依赖性。KU-0063794而不是 Rapamycin 抑制SGK1活性和在Ser⁴²²位点磷酸化，也抑制其生理底物NDGR1，与抑制S6K1 和Akt磷酸化程度相似，这种作用存在剂量依赖性，然而KU-0063794 不抑制佛波酯诱导的ERK 或RSK磷酸化和RSK激活。与Rapamycin相比, KU-0063794更有效诱导4E-BP1在 Thr³⁷, Thr⁴⁶和 Ser⁶⁵位点完全去磷酸化。KU-0063794抑制野生型和mLST8-缺陷型MEFs细胞生长，也诱导细胞周期停在G1期，比Rapamycin效果更显著。^[1]

体内研究

Ku0063794在肾脏上皮肾细胞癌的临床前模型中，抑制肿瘤生长和mTOR信号。然而，在动物研究中，Ku0063794没有temsirolimus有效，可能的原因是temsirolimus对肿瘤的微环境有重要的作用，能在异种移植瘤中减少血管生成，而Ku0063794无此效果。经Temsirolimus处理的肿瘤组织比Ku0063794处理的肿瘤组织更少地表达VEGF和PDGF^[2]。

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验	mTOR 复合物激酶检测实验
激酶实验	HEK-293细胞新鲜溶解在Hepes裂解液中。溶解产物(1-4 mg) 通过与5-20 μL G蛋白的琼脂糖凝胶结合免疫前抗体IgG温育而预先清除。裂解抽提物与5-20 μL G蛋白的琼脂糖凝胶结合的 5-20 μg抗Rictor或抗Raptor抗体的免疫前抗体IgG温育。所有抗体共价结合到蛋白G蛋白琼脂糖凝胶上。在振动转载台上4^oC下进行免疫沉淀1小时。使用Hepes 裂解液冲洗免疫沉淀物四次，随后使用Hepes激酶buffer冲洗两次。使用 Raptor免疫沉淀物磷酸化 S6K1, 两次冲洗的初始步骤中，buffer 含0.5 M NaCl，确保最佳激酶活性。血清饥饿的 HEK-293细胞中分离的GST-Akt1与PI-103(1 μM 进行 1 小时)温育。从血清饥饿的HEK-293 细胞中纯化的GST-S6K1与Rapamycin (0.1 μM进行1小时)温育。加入0.1 mM ATP和 10 mM MgCl₂ ，在不同浓度KU-0063794和GST-Akt1 (0.5 μg)或GST-S6K1 (0.5 μg)存在时，开始mTOR反应。反应在 30^oC下在振动转载台上进行30分钟，然后加入SDS样本缓冲液终止反应。反应混合物在0.22-μm-孔径大小 Spin-X过滤器上过滤，样本进行电泳处理，然后使用指定抗体进行免疫印迹分析。
细胞实验	细胞系	野生型和mLST8缺陷型MEFs
	浓度	溶于DMSO,终浓度为~3 μM
	处理时间	24, 48, 和72 小时
	方法	使用KU-0063794 处理细胞 24, 48, 和72 小时，每24小时更换一次培养基，加入新鲜溶解的KU-0063794。为了测量细胞生长，使用PBS冲洗细胞一次，然后与4% (v/v) 多聚甲醛在 PBS混合15分钟。用水冲洗一次后，使用溶于 10% 乙醇的0.1% 结晶紫对细胞染色20分钟，然后用水冲洗三次。使用0.5 mL 10% (v/v) 乙酸从细胞中抽提结晶紫20分钟。然后洗脱液在水中按1:10稀释，然后在 590 nm 处测量吸光值。为了测量细胞周期分布，通过胰蛋白酶化作用收集细胞，然后在PBS中冲洗一次，再悬浮于冰冻70% (v/v)乙醇中。细胞在 PBS和 1% (w/v) BSA中冲洗两次，再在 PBS 和含 50 g/mL 碘化丙啶和 50 g/mL RNase A的0.1% (v/v) Triton X-100中染色 20分钟。使用FACSCalibur流式细胞仪和CellQuest软件检测细胞中DNA含量。在线性标度上测量红色荧光(585 nm)，进行脉冲宽度分析用于排除双峰值。使用FlowJo软件测定细胞周期分布。
动物实验	动物模型	Nu/Nu裸鼠
	剂量	8 mg/kg
	给药处理	i.p.

参考文献

客户使用selleck产品的实验数据

: 数据来源于[Data independently produced by Oncogene, 2013, 10.1038/onc.2013.509]

: 数据来源于[, 286, 39450-6]

: 数据来源于[, 107, 1265-1274]

: , Dr. Yong-Weon Yi from Georgetown University Medical Center

KU-0063794在文献中得到引用

Resistin secreted by porcine alveolar macrophages leads to endothelial cell dysfunction during Haemophilus parasuis infection [ Virulence, 2023, 14(1):2171636]	PubMed: 36694280
Mechanosensitive mTORC2 independently coordinates leading and trailing edge polarity programs during neutrophil migration [ Mol Biol Cell, 2023, 34(5):ar35]	PubMed: 36857159
Combined Mcl-1 and YAP1/TAZ inhibition for treatment of metastatic uveal melanoma [ Melanoma Res, 2023, 10.1097/CMR.0000000000000911]	PubMed: 37467061
Aggresome assembly at the centrosome is driven by CP110-CEP97-CEP290 and centriolar satellites [ Nat Cell Biol, 2022, 24(4):483-496]	PubMed: 35411088
Inhibition of the Protein Arginine Methyltransferase PRMT5 in High-Risk Multiple Myeloma as a Novel Treatment Approach [ Front Cell Dev Biol, 2022, 10:879057]	PubMed: 35757005
Novel Treatments of Uveal Melanoma Identified with a Synthetic Lethal CRISPR/Cas9 Screen [ Cancers (Basel), 2022, 14(13)3186]	PubMed: 35804957
Jagged-1 is induced by mTOR inhibitors in renal cancer cells through an Akt/ALK5/Smad4-dependent mechanism [ Curr Res Pharmacol Drug Discov, 2022, 3:100117]	PubMed: 35992379
TRK-Fused Gene (TFG), a protein involved in protein secretion pathways, is an essential component of the antiviral innate immune response [ PLoS Pathog, 2021, 17(1):e1009111]	PubMed: 33411856
Effect of cell microenvironment on the drug sensitivity of hepatocellular cancer cells [ Oncotarget, 2021, 12(7):674-685]	PubMed: 33868588
TOR Inhibitors Synergistically Suppress the Growth and Development of Phytophthora infestans, a Highly Destructive Pathogenic Oomycete [ Front Microbiol, 2021, 12:596874]	PubMed: 33935983

特定的存储和包装每个产品的信息在产品说明书上都有注明。大多数Selleck产品，在推荐的条件下存储可稳定保存两年。产品有时建议的储存温度不同，大多数建议储存在-20°C，抑制剂属于化学试剂，可在常温下运输储存两周左右。即使如此，我们保证产品的出货量将保持产品质量的条件下，一般都会放入冰袋。望阁下收到产品后，请按照产品数据表建议适当存储。

如果需要长期保存，请于零下二十度低温保存。禁止用于人体及治疗！

退换货政策

Selleck提供宽松的退换货承诺，努力为您营造最优的购物体验。每个订单Selleck只提供一次退换货服务，为了确保您的权益，请您仔细阅读以下内容：

1. 请在返还样品之前事先与我们取得联系，以确保产品是直接向我们或者当地代理商购买的；

2. 自收到货物起七天内，如因运输过程有问题或其他任何问题，您可以提出退换货要求；自收到货物起365天内，如因产品质量有问题，您可以提出退换货要求。

3. 请使用我们的快递账号进行退换货，您无需为此承担任何费用。

4. 如您已收到由Selleck开具的发票，则办理退货或订单金额发生变更的换货时，请将发票随商品一同返还给Selleck。请您妥善保管发票，如发票丢失，将无法办理退换货手续。

5. 对于合理的退换货要求，我们会在5个工作日内处理完成您的款项退还和新换货物的运输等，请耐心等待。