Posaconazole

Posaconazole具有有效的杀椎虫活性。Amiodarone与Posaconazole产生协同作用。Posaconazole也会影响并打乱T. cruzi 中Ca²⁺内稳态。Posaconazole阻断寄生虫存活必需的麦角固醇生物合成。Posaconazole对前鞭体(细胞外)阶段的增殖具有明显的剂量依赖性作用，最低抑菌浓度为20 nM，IC50为14 nM。对临床相关的细胞内无鞭毛体寄生虫形式，Posaconazole具有更好的效能。Posaconazole的最低抑菌浓度和IC50值分别为3 nM和0.25 nM。[1]Posaconazole对耐Fluconazole，Voriconazole，和Amphotericin B的念珠菌和曲霉菌株具有活性，并且比其它三唑类抗接合菌药更有效。[2]

Amiodarone单独治疗感染的动物能够减少寄生虫血症，增加60天生存期(未处理的对照组为0%，amiodarone 处理的动物为40%)，与Posaconazole联合用药时，能够延缓寄生虫血症的发展。[1]与Posaconazole在禁食状态单独给药相比，Posaconazole与Boost Plus同时服用增加药物暴露。食物，特别是高脂肪含量的膳食，显著增加Posaconazole的生物利用度。与高脂和脱脂食物一起消耗时，全身接触Posaconazole分别增加其4倍和2.6倍的消耗。[3] Posaconazole 和 Amiodarone可能产生有效的抗T. cruzi治疗，并且副作用低。[4] Posaconazole(≥15 mg/kg，每天两次)延长小鼠生存，并减少组织负担。[5]

寄生虫的上鞭毛体型在肝脏灌注胰蛋白培养基中，用10%新生小牛血清增补，28 °C下强烈(120 rpm)搅拌培养。培养开始时，细胞密度为2×10⁶短膜型/mL，Posaconazole在细胞密度为0.5−1.0×10⁷短膜型/mL时加入。细胞密度使用电子粒子计数器测量，并通过血细胞计数器直接计数。细胞活性在台盼蓝排除法后，使用光学显微镜测定。无鞭毛体在维持最低必需培养液的Vero细胞中，用1%胎牛血清增补，在湿润的大气(95%空气−5% CO₂)中于37℃下培养。细胞以10个组织培养衍生的锥鞭毛体/细胞感染2小时，然后用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤3次以除去非粘附寄生虫。加入包含或不包含Posaconazole的新鲜培养基，细胞培养96小时，第48小时更换培养基。感染细胞的百分比和每个细胞中寄生虫数量使用光学显微镜直接测定，并对结果进行统计分析。IC50值使用GraFit程序通过非线性回归计算。并计算抑菌浓度指数(FIC)。对照组和药物处理的细胞外短膜型组中，细胞质的游离Ca²⁺浓度使用Fura-2通过荧光测定。亚细胞的Ca²⁺水平和线粒体膜电位在感染T. cruzi无鞭毛体的单个Vero细胞中通过使用时间扫描共聚焦显微镜监测。简而言之，严重感染(72 小时)T. cruzi无鞭毛体的Vero细胞接种在22×40 mm玻片上(0.15 mm 厚)，同时与10 μM细胞渗透性Rhod-2和10 μg/mL 罗丹明-123于37℃下在培养基中培养50分钟，然后清洗，并与包含或不包含amiodarone 的林格氏溶液一起培养。该条件下的Rhod-2荧光主要来自细胞内Ca²⁺富集区，如线粒体中，这是由于Rhod-2对Ca²⁺的低亲和力限制了其在Ca²⁺缺乏的Vero细胞或无鞭毛体细胞质中的荧光性。罗丹明-123是线粒体特异性阳离子染料，能够严格按照膜电位穿过线粒体膜分布。

• [1] Benaim G, et al. J Med Chem. 2006, 49(3), 892-389.
• [2] Sabatelli F, et al. Antimicrob Agents Chemother. 2006, 50(6), 2009-2015.
• [3] Sansone-Parsons A, et al. Antimicrob Agents Chemother. 2006, 50(5), 1881-1883.

• [4] Veiga-Santos P, et al. Int J Antimicrob Agents. 2012, 40, 61-71.
• [5] Sun QN, et al. Antimicrob Agents Chemother. 2002, 46(7), 2310-2312.
• [6] Herbrecht R, et al. Int J Clin Pract. 2004, 58(6):612-24.

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