Activin Receptor Type IIB/ACVR2B Antibody [A7P16] Datasheet

生物描述

特异性	Activin Receptor Type IIB/ACVR2B Antibody [A7P16] 可检测内源性 Activin Receptor Type IIB/ACVR2B 总蛋白水平。
背景	激活素受体IIB型/ACVR2B (ActRIIB) 是一种跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体，属于转化生长因子β (TGF-β) 超家族的II型受体家族，对激活素和肌生长抑制素信号传导至关重要。它广泛表达于各种组织，包括骨骼肌、生殖器官和神经系统，并调节多种生物过程，例如细胞生长、细胞凋亡、纤维化、炎症、神经发生和肌肉稳态。从结构上讲，ACVR2B 由一个胞外配体结合结构域、一个单次跨膜螺旋和一个胞质丝氨酸/苏氨酸激酶结构域组成。胞外结构域以高亲和力结合激活素，并优先与肌生长抑制素 (GDF-8) 相互作用；而胞内激酶结构域则磷酸化下游 I 型受体（例如激活素的 ALK4/ActRIB 和肌生长抑制素的 ALK5/TβRI），从而启动 SMAD 依赖性转录反应。ACVR2B 激酶结构域呈现保守的双叶折叠，N 端小叶包含 β 折叠和 αC 螺旋，C 端较大叶包含激活环，铰链区形成 ATP 结合口袋。ActRIIB 独特的结构特征，包括作为守门残基的 Thr265 和由 Phe247 稳定的后口袋，使其在 II 型受体亚家族中脱颖而出，并使其成为一个有前景的药物靶点。从功能上讲，ACVR2B 介导激活素诱导的促卵泡激素 (FSH) 调节和肌生长抑制素介导的骨骼肌生长抑制，使其与肌营养不良症、肌肉减少症、恶病质、糖尿病和纤维化等疾病高度相关，其结构为设计用于治疗干预的选择性抑制剂提供了框架。

特异性

Activin Receptor Type IIB/ACVR2B Antibody [A7P16] 可检测内源性 Activin Receptor Type IIB/ACVR2B 总蛋白水平。

背景

激活素受体IIB型/ACVR2B (ActRIIB) 是一种跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体，属于转化生长因子β (TGF-β) 超家族的II型受体家族，对激活素和肌生长抑制素信号传导至关重要。它广泛表达于各种组织，包括骨骼肌、生殖器官和神经系统，并调节多种生物过程，例如细胞生长、细胞凋亡、纤维化、炎症、神经发生和肌肉稳态。从结构上讲，ACVR2B 由一个胞外配体结合结构域、一个单次跨膜螺旋和一个胞质丝氨酸/苏氨酸激酶结构域组成。胞外结构域以高亲和力结合激活素，并优先与肌生长抑制素 (GDF-8) 相互作用；而胞内激酶结构域则磷酸化下游 I 型受体（例如激活素的 ALK4/ActRIB 和肌生长抑制素的 ALK5/TβRI），从而启动 SMAD 依赖性转录反应。ACVR2B 激酶结构域呈现保守的双叶折叠，N 端小叶包含 β 折叠和 αC 螺旋，C 端较大叶包含激活环，铰链区形成 ATP 结合口袋。ActRIIB 独特的结构特征，包括作为守门残基的 Thr265 和由 Phe247 稳定的后口袋，使其在 II 型受体亚家族中脱颖而出，并使其成为一个有前景的药物靶点。从功能上讲，ACVR2B 介导激活素诱导的促卵泡激素 (FSH) 调节和肌生长抑制素介导的骨骼肌生长抑制，使其与肌营养不良症、肌肉减少症、恶病质、糖尿病和纤维化等疾病高度相关，其结构为设计用于治疗干预的选择性抑制剂提供了框架。

使用信息

抗体应用

WB, FCM, ELISA

稀释比例

WB	FCM
1:500	1:800

反应性

Human

抗体类型

Mouse Monoclonal Antibody

MW

58 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Han S. Vitam Horm. 2011;85:29-38.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: 293T (transfected with IIB/ACVR2B), Lane 2: 293T