BACH2 Antibody (Rabbit mAb) [N18E12] Datasheet

生物描述

特异性	BACH2 Antibody (Rabbit mAb) [N18E12] 可检测内源性 BACH2 总蛋白水平。
背景	BACH2，即BTB和CNC同源物2，属于BTB-碱性亮氨酸拉链转录抑制因子家族，需要与MAFK等小Maf蛋白形成异二聚体才能结合DNA上的Maf识别元件，从而抑制靶基因转录。它主要在B细胞和T细胞中表达，并在适应性免疫的两个不同分支中发挥作用。在生发中心B细胞中，BACH2与MAFK形成复合物，结合于调控生发中心反应的基因集的染色质上。染色质免疫沉淀测序显示，BACH2和BCL6的结合位点存在大量重叠，包括共同占据调控PRDM1（浆细胞分化的主要驱动因子）的调控序列。BCL6和BACH2通过物理和生化机制相互协作，将彼此募集到共享的DNA结合位点或邻近的调控元件上。此外，BCL6还能稳定BACH2蛋白，因此这两个因子在生发中心B细胞中的表达水平呈正相关。 BCL6和BACH2的杂合性缺失（而非单独缺失其中任何一个）会导致生发中心形成显著减少，并加速浆细胞过早分化，其特征是Prdm1、Xbp1和CD138表达升高。这表明BCL6和BACH2作为一个协同抑制单元发挥作用，而非通过独立的累加作用。在T细胞区室中，BACH2抑制广泛的效应分化基因网络，以稳定调节性T细胞的特性，抑制CD4阳性T细胞向炎症效应谱系的分化，同时支持Foxp3依赖的调节程序。这种抑制作用延伸至白细胞介素-2受体信号通路：BACH2直接抑制IL-2受体α链CD25的表达。这种抑制作用对于静息调节性T细胞的静止、存活和长期维持至关重要。BACH2的缺失会导致CD25和IL-2R信号通路增强，但这只能部分补偿Treg存活受损的情况。 BACH2介导的CD25抑制还影响滤泡调节性T细胞的发育，BACH2的转录抑制活性与多个T细胞亚群中调节性和效应性状态之间的平衡相关，而非与单一谱系决定相关。在B细胞和T细胞中，BACH2都发挥着调节器的作用，抑制终末效应细胞或浆细胞的分化，促进静止细胞、记忆细胞或调节性T细胞的命运。BACH2-BCL6平衡的失调或BACH2依赖性Treg细胞稳定性的异常与自身免疫易感性和B细胞恶性肿瘤有关。

特异性

BACH2 Antibody (Rabbit mAb) [N18E12] 可检测内源性 BACH2 总蛋白水平。

背景

BACH2，即BTB和CNC同源物2，属于BTB-碱性亮氨酸拉链转录抑制因子家族，需要与MAFK等小Maf蛋白形成异二聚体才能结合DNA上的Maf识别元件，从而抑制靶基因转录。它主要在B细胞和T细胞中表达，并在适应性免疫的两个不同分支中发挥作用。在生发中心B细胞中，BACH2与MAFK形成复合物，结合于调控生发中心反应的基因集的染色质上。染色质免疫沉淀测序显示，BACH2和BCL6的结合位点存在大量重叠，包括共同占据调控PRDM1（浆细胞分化的主要驱动因子）的调控序列。BCL6和BACH2通过物理和生化机制相互协作，将彼此募集到共享的DNA结合位点或邻近的调控元件上。此外，BCL6还能稳定BACH2蛋白，因此这两个因子在生发中心B细胞中的表达水平呈正相关。 BCL6和BACH2的杂合性缺失（而非单独缺失其中任何一个）会导致生发中心形成显著减少，并加速浆细胞过早分化，其特征是Prdm1、Xbp1和CD138表达升高。这表明BCL6和BACH2作为一个协同抑制单元发挥作用，而非通过独立的累加作用。在T细胞区室中，BACH2抑制广泛的效应分化基因网络，以稳定调节性T细胞的特性，抑制CD4阳性T细胞向炎症效应谱系的分化，同时支持Foxp3依赖的调节程序。这种抑制作用延伸至白细胞介素-2受体信号通路：BACH2直接抑制IL-2受体α链CD25的表达。这种抑制作用对于静息调节性T细胞的静止、存活和长期维持至关重要。BACH2的缺失会导致CD25和IL-2R信号通路增强，但这只能部分补偿Treg存活受损的情况。 BACH2介导的CD25抑制还影响滤泡调节性T细胞的发育，BACH2的转录抑制活性与多个T细胞亚群中调节性和效应性状态之间的平衡相关，而非与单一谱系决定相关。在B细胞和T细胞中，BACH2都发挥着调节器的作用，抑制终末效应细胞或浆细胞的分化，促进静止细胞、记忆细胞或调节性T细胞的命运。BACH2-BCL6平衡的失调或BACH2依赖性Treg细胞稳定性的异常与自身免疫易感性和B细胞恶性肿瘤有关。

使用信息

抗体应用

WB, IP, FCM, ELISA

稀释比例

WB	IP	FCM
1:1000	1:100	1:50

反应性

Human, Mouse

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

93 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

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