Bad Rabbit mAb

目录号：F3233

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生物描述

特异性 Bad Rabbit mAb 用于检测内源性 Bad 总的蛋白水平。该抗体不与其他 Bcl-2 成员发生交叉反应。该抗体未经小鼠和大鼠 WB实验验证。
背景 BAD是Bcl-2蛋白家族中具有促凋亡作用的成员，调控细胞存活与凋亡。它不含跨膜结构域，通过与抗凋亡蛋白（如Bcl-2和Bcl-xL）结合，取代促凋亡因子Bax，从而促进细胞死亡。在未磷酸化状态下，BAD在膜区与Bcl-xL形成异二聚体，中和其保护作用；而当细胞接收到诸如IL-3等生存信号时，激活的激酶会在其丝氨酸残基上磷酸化BAD，使其被14-3-3蛋白在细胞质中捕获，从而阻止其与Bcl-xL的相互作用，抑制凋亡。BAD的磷酸化状态充当着分子开关，将细胞外信号与凋亡调控联系起来，其失调与癌症及神经退行性疾病的发生密切相关。

使用信息

抗体应用 WB, IHC, IF, FCM 稀释比例
WB IHC IF FCM
1:1000 1:1000 1:50 1:20
反应性 Human, Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit MW 18 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
22. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 
IF

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