β Amyloid (Aβ) 1-42 Antibody (Rabbit mAb) [M4F1]

目录号：F1146

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生物描述

特异性

β Amyloid (Aβ) 1-42 Antibody (Rabbit mAb) [M4F1] 可检测内源性 β Amyloid (Aβ) 1-42 总蛋白水平。
背景

β-淀粉样蛋白1-42 (β-Amyloid 1-42) 是一种肽片段，由淀粉样前体蛋白 (APP) 通过连续的蛋白水解切割释放而来，是APP代谢中淀粉样蛋白生成加工分支的主要产物。全长APP在细胞表面和内吞隔室中被β-分泌酶 (BACE1) 切割，生成可溶性N端片段sAPPβ和膜滞留的C端片段C99。由早老素、尼卡斯特林、Pen-2和Aph-1亚基组成的γ-分泌酶复合物对C99进行连续切割，将Aβ及其胞内结构域AICD释放到细胞外空间。AICD本身作为转录调节因子，影响APP的进一步表达。这种淀粉样蛋白生成途径与非淀粉样蛋白生成途径竞争，在非淀粉样蛋白生成途径中，α-分泌酶在Aβ结构域内的切割阻止了完整肽的形成，转而产生具有神经保护作用的片段sAPPα，这使得分泌酶的平衡成为Aβ输出的决定因素。一旦生成，Aβ1-42会自组装成可溶性寡聚体和更高级的纤维，这些纤维会积聚形成细胞外斑块，并与神经元膜脂质、离子通道和表面受体相互作用，从而破坏突触信号传导和钙稳态。Aβ病理与tau蛋白生物学通过共同的激酶信号中间体相互交织，这些中间体促进tau蛋白过度磷酸化，进而驱动微管不稳定和神经原纤维缠结的形成，形成一个平行的病理级联反应。 BACE1的裂解是淀粉样蛋白生成途径的限速步骤，其活性受细胞运输、膜脂筏组成以及应激反应激酶信号通路（包括JNK和p38 MAPK通路）的影响，这些通路在氧化条件下可上调BACE1的表达。Aβ1-42也会在脑血管壁内积聚，导致脑淀粉样血管病，这是一种与淀粉样蛋白生成途径有重叠但又不同的血管病理。

使用信息

抗体应用 IHC, Dot 稀释比例
IHC
1:2000
反应性 Mouse, Human
抗体类型 Rabbit Monoclonal Antibody MW 87 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

Application Data

WB

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