C-Peptide Antibody (Rabbit mAb) [H2G21] Datasheet

生物描述

特异性	C-Peptide Antibody (Rabbit mAb) [H2G21] 可检测内源性 C-Peptide，这是一种胰岛素加工过程中产生的肽。
背景	胰岛素原C肽是胰岛素原加工过程中切除的连接片段，与胰岛素等摩尔量从胰岛β细胞释放。从结构上看，它属于胰岛素家族，但从功能上看，它是一种独立的信号分子，而非惰性的加工残余物。C肽通过立体特异性相互作用以纳摩尔浓度与细胞表面结合，且与胰岛素、胰岛素原或相关生长因子无交叉反应，这表明它与一种独特的受体（很可能是G蛋白偶联受体）而非经典的胰岛素受体结合。受体结合对百日咳毒素敏感，提示其通过Gαi/o偶联。然而，C肽也能激活蛋白激酶C（PKC），该通路通常与Gαq偶联受体相关。这种现象可以用G蛋白的混杂性来解释，即受体根据细胞外胰岛素和C肽的相对浓度改变其偶联偏好。在低胰岛素水平下，受体与Gαi/o亚基的结合增强，从而增强胰岛素相关MAPK信号通路及其下游Akt活性；而在高胰岛素水平下，受体则倾向于与Gαq亚基结合，驱动PKC激活，进而通过IRS-1的丝氨酸/苏氨酸磷酸化抑制胰岛素信号传导。这使得C肽成为一种浓度依赖性调节因子，能够精细调控胰岛素信号强度，而非仅仅作为旁观者发挥作用。受体结合还会进一步触发细胞内钙离子浓度升高、磷脂酰肌醇-3-激酶活性增强、Na+/K+-ATP酶活性激活、内皮型一氧化氮合酶转录诱导以及MAPK级联反应的激活。这些下游效应最终在血管内皮细胞中发挥血管舒张、抗炎、抗凋亡和抗氧化等功能，并通过直接和间接的受体介导途径对红细胞和免疫细胞产生影响。孤儿受体GPR146已被鉴定为C肽信号复合物的组成部分，因为敲低GPR146可消除C肽诱导的早期基因表达，且受体特异性抗体可阻断C肽特异性下游效应而不影响胰岛素作用，这表明GPR146是C肽组织特异性信号传导的候选介质。糖尿病并发症，包括周围神经和肾功能障碍，与Na+/K+-ATP酶活性降低相关，在胰岛素缺乏状态下恢复C肽水平可逆转这些功能和结构异常，从而将受体介导的信号级联与C肽在肾脏、神经和微血管中的保护作用直接联系起来，并强调了C肽作为评估组织特异性胰岛素邻近信号传导靶点的重要性。

特异性

C-Peptide Antibody (Rabbit mAb) [H2G21] 可检测内源性 C-Peptide，这是一种胰岛素加工过程中产生的肽。

背景

胰岛素原C肽是胰岛素原加工过程中切除的连接片段，与胰岛素等摩尔量从胰岛β细胞释放。从结构上看，它属于胰岛素家族，但从功能上看，它是一种独立的信号分子，而非惰性的加工残余物。C肽通过立体特异性相互作用以纳摩尔浓度与细胞表面结合，且与胰岛素、胰岛素原或相关生长因子无交叉反应，这表明它与一种独特的受体（很可能是G蛋白偶联受体）而非经典的胰岛素受体结合。受体结合对百日咳毒素敏感，提示其通过Gαi/o偶联。然而，C肽也能激活蛋白激酶C（PKC），该通路通常与Gαq偶联受体相关。这种现象可以用G蛋白的混杂性来解释，即受体根据细胞外胰岛素和C肽的相对浓度改变其偶联偏好。在低胰岛素水平下，受体与Gαi/o亚基的结合增强，从而增强胰岛素相关MAPK信号通路及其下游Akt活性；而在高胰岛素水平下，受体则倾向于与Gαq亚基结合，驱动PKC激活，进而通过IRS-1的丝氨酸/苏氨酸磷酸化抑制胰岛素信号传导。这使得C肽成为一种浓度依赖性调节因子，能够精细调控胰岛素信号强度，而非仅仅作为旁观者发挥作用。受体结合还会进一步触发细胞内钙离子浓度升高、磷脂酰肌醇-3-激酶活性增强、Na+/K+-ATP酶活性激活、内皮型一氧化氮合酶转录诱导以及MAPK级联反应的激活。这些下游效应最终在血管内皮细胞中发挥血管舒张、抗炎、抗凋亡和抗氧化等功能，并通过直接和间接的受体介导途径对红细胞和免疫细胞产生影响。孤儿受体GPR146已被鉴定为C肽信号复合物的组成部分，因为敲低GPR146可消除C肽诱导的早期基因表达，且受体特异性抗体可阻断C肽特异性下游效应而不影响胰岛素作用，这表明GPR146是C肽组织特异性信号传导的候选介质。糖尿病并发症，包括周围神经和肾功能障碍，与Na+/K+-ATP酶活性降低相关，在胰岛素缺乏状态下恢复C肽水平可逆转这些功能和结构异常，从而将受体介导的信号级联与C肽在肾脏、神经和微血管中的保护作用直接联系起来，并强调了C肽作为评估组织特异性胰岛素邻近信号传导靶点的重要性。

使用信息

抗体应用

IHC, ELISA

稀释比例

IHC

1:10000

反应性

Mouse, Rat, Human

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

12 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
IHC	实验步骤：脱蜡/补液 1. 脱蜡/水合切片： 2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。 3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。 4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。 5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。 2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。 3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。 5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。 6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。 7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。 9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。 11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。 12. 将载玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用苏木精复染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。 16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

实验方法

IHC

实验步骤：

脱蜡/补液

1. 脱蜡/水合切片：

2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。

3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。

4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。

5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。

2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。

3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。

5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。

6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。

7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。

9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。

11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。

12. 将载玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用苏木精复染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。

16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

文献参考

Application Data

IHC

Validated by Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human pancreas tissue with F5835 at 1:10000 dilution.