CD11b Antibody [F15D4]

目录号：F0040

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生物描述

特异性 CD11b Antibody [F15D4] 可检测内源性 CD11b 总蛋白水平。
背景 CD11b，又称整合素αM（ITGAM），是一种跨膜α链蛋白，它与β-2链CD18非共价异二聚化形成Mac-1（αMβ2或CR3）整合素。Mac-1整合素在髓系细胞（如中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞）上高表达，是这些固有免疫细胞群的关键标志物。该整合素的α亚基包含一个β螺旋桨结构域和一个配体结合插入（I/A）结构域，使其能够与多种配体相互作用，包括iC3b、ICAM-1和纤维蛋白原。与疾病相关的ITGAM变异体，例如R77H (rs1143679)、P1146S (rs1143678)和A858V (rs1143683)，会轻微改变β螺旋桨结构，降低配体亲和力，但不会显著影响表面表达。CD11b介导促炎过程，例如白细胞黏附、迁移、跨内皮迁移以及对调理素化颗粒（凋亡细胞和免疫复合物）的吞噬作用，同时还通过Src/Syk介导的磷酸化以及Cbl-b依赖的MyD88和TRIF的泛素化和降解，负向调控Toll样受体(TLR)信号通路，从而发挥重要的抗炎作用，抑制NF-κB活化和促炎细胞因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）的产生。 CD11b 还通过 AKT/FOXO3/IRF3/7 通路抑制 I 型干扰素 (IFN-I) 的产生，维持核内 FOXO3 的存在以抑制 IRF7 和 IFN-β/IRF7 的表达；ITGAM 变异携带者的这一机制存在缺陷，导致基础 IFN-I 水平升高、TLR 反应失控、B 细胞耐受性受损、自身反应性 B 细胞活化增强以及 Th17 细胞分化增加。这些免疫失调赋予系统性红斑狼疮 (SLE) 和狼疮性肾炎 (LN) 的高遗传风险，ITGAM 变异与血清 IFN-I 水平升高、肾脏受累、自身抗体产生、肾小球损伤和免疫复合物清除不良相关。

使用信息

抗体应用 IP, IHC, FCM 稀释比例
IHC FCM
1:100 1:4000
反应性 Mouse
抗体类型 Rat Monoclonal Antibody MW 165-170 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

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