CD11b + CD11c Antibody [C8C21]

目录号：F1536

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生物描述

特异性 CD11b + CD11c Antibody [C8C21] 可检测内源性 CD11b 和 CD11c 总蛋白水平。
背景 CD11b（αM，ITGAM）和 CD11c（αX，ITGAX）是 β2 整合素家族（CD11/CD18）的整合素 α 亚基，分别形成异二聚体 CD11b/CD18（Mac-1，CR3）和 CD11c/CD18（p150,95，CR4），主要表达于髓系白细胞，包括单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞。两者均具有大的胞外区，包含一个七叶 β 螺旋桨结构域、大腿结构域、小腿 1/小腿 2 结构域以及一个插入的 I 结构域（血管性血友病因子 A 样结构域），该 I 结构域是主要的配体结合位点，包含一个金属离子依赖性粘附位点（MIDAS），其中 Asp、Ser 和 Glu 残基与 Mg²⁺ 配位； CD11c/CD18 可呈现弯曲（低亲和力）、伸展闭合和伸展开放（高亲和力）三种构象，这些构象受 talin 与 β2 尾部结合的调控，其中 CD11c 在 α 链 Ser1158 位点的磷酸化可增强其活化。CD11b/CD18 结合 iC3b、ICAM-1 和纤维蛋白原，通过 PI3K/Akt 信号通路介导白细胞黏附、跨内皮迁移、吞噬调理素化颗粒以及呼吸爆发；而 CD11c/CD18 则以类似方式促进 iC3b/补体介导的吞噬作用、树突状细胞 (DC) 抗原捕获（例如 CD47 缺陷细胞）以及与内皮/纤连蛋白的黏附，进而触发细胞骨架重塑、NF-κB/MAPK 激活和细胞因子产生，从而参与先天性和适应性免疫。失调会导致慢性炎症（例如类风湿性关节炎）、通过巨噬细胞浸润导致高血压，并通过免疫监视受损导致癌症进展。

使用信息

抗体应用 IHC, IF 稀释比例
IHC IF
1:1000 1:2000
反应性 Rat
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 
IF
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
 
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
 
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
 
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
 
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
 

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