CD59 Antibody (Mouse mAb) [M4G24]

目录号：F2130

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生物描述

特异性

CD59 Antibody (Mouse mAb) [M4G24] 可检测内源性 CD59 总蛋白水平。
背景

CD59是一种小型糖基磷脂酰肌醇锚定膜糖蛋白，作为末端补体途径的主要细胞表面抑制剂，广泛表达于造血和非造血的人类细胞中。膜攻击复合物的组装是通过补体蛋白C5b、C6、C7、C8和C9的顺序募集实现的。在此过程中，C8和C9各自经历显著的构象转变，其MACPF结构域内的螺旋束展开成插入膜的β发夹结构，从而驱动孔道的形成。CD59不与可溶性C8或C9结合，但一旦C8或C9被整合到新生复合物中，CD59就能特异性地与它们结合，在孔道插入发生之前捕获C5b-8和C5b-9的组装中间体。 CD59 与 C8 的成孔 β-发夹区域结合，形成分子间 β-折叠，从而物理性地阻断 C8 自身对膜的穿孔，同时改变第一个试图插入膜的 C9 β-发夹的运动轨迹。通过改变初始 C9 插入的路径，CD59 限制了后续 C9 单体加入正在形成的孔所需的构象转变，从而阻止了整个膜攻击复合物的聚合，而不是单独阻断任何单个结合步骤。这种双重机制——直接空间位阻 C8 和间接干扰 C9 聚合——使得单个 CD59 分子能够在膜攻击复合物逐步构建的多个阶段阻止其组装。细胞表面CD59及其相关调节因子CD55的缺失几乎普遍由PIGA基因的体细胞突变引起，该突变破坏了糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白生物合成的第一步，并阻止了这两种蛋白正确锚定于受影响的造血细胞。这种GPI锚定缺陷是阵发性睡眠性血红蛋白尿症的根本原因，由于CD59的缺失，红细胞无法抵抗膜攻击复合物的组装，从而导致慢性补体介导的血管内溶血。

使用信息

抗体应用 IHC, FCM 稀释比例
IHC FCM
1:1000 1:500
反应性 Human
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW 14 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

Application Data

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human placental tissue with F2130 at 1:1000 dilution.