Claudin18.2 Antibody [L24N19]

目录号：F3733

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生物描述

特异性 Claudin18.2 Antibody [L24N19] 可检测内源性 Claudin18.2 总蛋白水平。
背景 Claudin 18.2 (CLDN18.2) 是紧密连接蛋白家族中胃特异性亚型，由位于 3q22 染色体上的 CLDN18 基因编码。它通过四个跨膜结构域和两个胞外环 (ECL1/ECL2) 参与胃黏膜屏障的形成，这两个结构域和胞外环通过保守的静电基序介导顺式和反式 Claudin 蛋白间的相互作用。其短的胞内 C 端 PDZ 结合尾通过磷酸化敏感残基募集 ZO-1/2，并将该复合物连接到肌动蛋白细胞骨架，从而实现细胞旁路 H⁺ 和 Na⁺ 的阻隔，并维持分化胃黏膜上皮细胞的极性。在分化胃黏膜中，CLDN18.2 定位于紧密连接 (TJ) 链。作为其核心屏障功能的一部分，CLDN18.2 聚合形成连续的紧密连接链，选择性地阻断胃酸中的质子泄漏。ECL2 残基 W221、N242 和 E248 形成一个浅沟，介导同型相互作用，调节离子电导（Na⁺ 的 Km 值约为 10–50 mM），并阻止管腔内容物进入基底外侧区室。胞质尾部与闭合蛋白 (occludin) 和 JAM-1 协同作用，形成胆固醇依赖性超分子复合物，在应激条件下动态重塑连接结构。PKC/ERK 介导的磷酸化作用可短暂增加通透性，而不会丧失极性。在肿瘤发生过程中，由于极性丧失导致 CLDN18.2 表位异常暴露，从而使抗体能够接近，触发抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用 (ADCC) 和补体依赖性细胞毒性作用 (CDC)，并阻断转移扩散。 CLDN18.2 在 40-60% 的胃癌和胃食管交界处 (GEJ) 癌中表达，它通过 YAP/IGF1R/AKT 信号传导驱动增殖和治疗耐药性。

使用信息

抗体应用 IHC 稀释比例
IHC
1:500
反应性 Mouse, Rat, Human
抗体类型 Rabbit Monoclonal Antibody MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

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