Collagen IV Antibody (Rabbit mAb) [L21P9] Datasheet

生物描述

特异性	Collagen IV Antibody (Rabbit mAb) [L21P9] 可检测内源性 Collagen IV 总蛋白水平。
背景	IV型胶原蛋白属于非纤维胶原蛋白家族，是基底膜的主要结构支架。它并非由单一的α链组装而成，而是由六条不同的、遗传相关的α链（α1至α6）组成。每条α链都包含一个由Gly-XY重复序列构成的长中央胶原结构域，该结构域被短的非胶原序列间断，并以非胶原NC1结构域终止。三条α链结合形成三螺旋原体，这些原体随后通过两个特定的连接点首尾相连形成超分子网络：相邻原体的羧基末端发生NC1-NC1二聚化，氨基末端通过7S结构域相互作用形成四聚体。氯离子特异性地介导NC1三聚体结构域的寡聚化，从而在原体-原体界面形成NC1六聚体。链选择形成原聚体和网络组装并非随机，而是直接编码在 NC1 结构域本身中，因为使用重组 NC1 结构域的重新关联实验表明，这些序列本身就足以指导哪些 α 链配对，并且这六条链分布到三个生物学上不同的网络中：一个广泛表达于大多数基底膜的 α1.α2 网络，一个仅限于包括成熟肾小球基底膜在内的特殊组织的 α3.α4.α5 网络，以及一个存在于平滑肌基底膜中的 α1.α2.α5.α6 网络，其中含有 α5.α6 的原聚体通过 NC1-NC1 相互作用与相邻的 α1.α2 原聚体连接。这种网络特异性具有直接的病理后果：在同一NC1编码的组装系统中同时存在α5和α6链，解释了X连锁Alport综合征中基底膜α5和α6链的同步丢失；而在肾小球中，当NC1结构域突变破坏六聚体组装时，从胎儿α1-α2网络到成熟α3-α4-α5网络的正常发育转变就会失败，因为α3-α4-α5 NC1六聚体的形成需要所有三个链特异性NC1单体的共同组装，所以单个缺陷链即可阻断整个三联体的网络形成。在Goodpasture综合征中，自身抗体靶向同一α3-α4-α5 NC1六聚体内的构象表位，这直接表明NC1组装界面既是网络完整性的结构决定因素，也是自身免疫性基底膜疾病的抗原靶点。

特异性

Collagen IV Antibody (Rabbit mAb) [L21P9] 可检测内源性 Collagen IV 总蛋白水平。

背景

IV型胶原蛋白属于非纤维胶原蛋白家族，是基底膜的主要结构支架。它并非由单一的α链组装而成，而是由六条不同的、遗传相关的α链（α1至α6）组成。每条α链都包含一个由Gly-XY重复序列构成的长中央胶原结构域，该结构域被短的非胶原序列间断，并以非胶原NC1结构域终止。三条α链结合形成三螺旋原体，这些原体随后通过两个特定的连接点首尾相连形成超分子网络：相邻原体的羧基末端发生NC1-NC1二聚化，氨基末端通过7S结构域相互作用形成四聚体。氯离子特异性地介导NC1三聚体结构域的寡聚化，从而在原体-原体界面形成NC1六聚体。链选择形成原聚体和网络组装并非随机，而是直接编码在 NC1 结构域本身中，因为使用重组 NC1 结构域的重新关联实验表明，这些序列本身就足以指导哪些 α 链配对，并且这六条链分布到三个生物学上不同的网络中：一个广泛表达于大多数基底膜的 α1.α2 网络，一个仅限于包括成熟肾小球基底膜在内的特殊组织的 α3.α4.α5 网络，以及一个存在于平滑肌基底膜中的 α1.α2.α5.α6 网络，其中含有 α5.α6 的原聚体通过 NC1-NC1 相互作用与相邻的 α1.α2 原聚体连接。这种网络特异性具有直接的病理后果：在同一NC1编码的组装系统中同时存在α5和α6链，解释了X连锁Alport综合征中基底膜α5和α6链的同步丢失；而在肾小球中，当NC1结构域突变破坏六聚体组装时，从胎儿α1-α2网络到成熟α3-α4-α5网络的正常发育转变就会失败，因为α3-α4-α5 NC1六聚体的形成需要所有三个链特异性NC1单体的共同组装，所以单个缺陷链即可阻断整个三联体的网络形成。在Goodpasture综合征中，自身抗体靶向同一α3-α4-α5 NC1六聚体内的构象表位，这直接表明NC1组装界面既是网络完整性的结构决定因素，也是自身免疫性基底膜疾病的抗原靶点。

使用信息

抗体应用

IHC

稀释比例

IHC

1:500

反应性

Mouse, Rat, Human

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

161 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
IHC	实验步骤：脱蜡/补液 1. 脱蜡/水合切片： 2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。 3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。 4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。 5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。 2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。 3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。 5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。 6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。 7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。 9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。 11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。 12. 将载玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用苏木精复染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。 16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

实验方法

IHC

实验步骤：

脱蜡/补液

1. 脱蜡/水合切片：

2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。

3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。

4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。

5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。

2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。

3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。

5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。

6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。

7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。

9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。

11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。

12. 将载玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用苏木精复染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。

16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

文献参考

Application Data

IHC

Validated by Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human kidney tissue with F7452 at 1:500 dilution.