Complex I Immunocapture Antibody [K15L2]

目录号：F2553

打印

生物描述

特异性 Complex I Immunocapture Antibody [K15L2] 可检测内源性 Complex I Immunocapture 总蛋白水平。
背景 复合物I（NADH：泛醌氧化还原酶）是线粒体内膜上最大的L形酶复合物，由约45个亚基组成，其中14个核心亚基在不同物种间保守。其亲水性外周臂包含FMN辅因子和8-9个铁硫簇（例如N3、N1b、N4、N5、N6a/b、N2）组成的电子传递链，而膜臂则包含四个质子泵模块（P_D、P_P、P_NuoL、P_NuoM），这些模块由带电残基和螺旋重排驱动。来自线粒体基质NADH的电子从N模块（NDUFV1/2）进入，沿着FeS簇穿过约90 Å到达Q模块的N2 [4Fe-4S]簇（靠近NDUFS2/7），并通过半醌中间体在约30 Å的隧道中还原泛醌。该氧化还原反应（驱动力约为-150 mV）与构象波介导的每两个电子携带四个质子的矢量易位紧密耦合。泛醌的结合引发双态稳定，使复合物刚性化，并通过反向转运样螺旋（ND2/4/5中的TMH 38-42）将变构变化从Q位点传递到远端泵，从而产生用于ATP合成的膜电位（Δψ），并通过保持N2-Q距离较短（约7 Å）来最大限度地减少超氧化物的产生。作为氧化磷酸化的入口，复合物I维持细胞能量平衡，连接三羧酸循环和NADH稳态，并影响活性氧信号传导和线粒体DNA的维持。由基因突变（例如NDUFS4、ND1）或组装缺陷引起的功能障碍会导致活性氧水平升高、生物能量代谢受损，并引发多种疾病，例如莱氏综合征、MELAS、帕金森病（通过抑制α-突触核蛋白）和莱伯氏遗传性视神经病变，尤其会影响能量需求高的神经元。

使用信息

抗体应用 IP, IF, FCM 稀释比例
IP IF FCM
1:10 1:1000 1:1000
反应性 Mouse, Rat, Cow, Human
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IF
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
 
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
 
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
 
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
 
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
 

Application Data