CRBN Antibody [M9N10] Datasheet

生物描述

特异性	CRBN Antibody [M9N10] 可检测内源性 CRBN 总蛋白水平。
背景	脑蛋白（CRBN）作为Cullin-RING E3泛素连接酶4（CRL4^CRBN^）复合物中的底物受体发挥作用。该复合物由DDB1、CUL4、RBX1和CRBN组成，介导靶蛋白的泛素化和蛋白酶体降解，从而调节蛋白质稳态、肢体发育、神经元功能和免疫信号传导。CRBN具有三部分结构：N端为Lon蛋白酶样结构域，中央为介导DDB1相互作用的螺旋束结构域，C端为包含假尿苷合酶和古菌苷转糖基酶（PUA）折叠的C端结构域。该C端结构域包含底物识别界面和一个由半胱氨酸残基配位的保守锌结合位点。该蛋白作为DCAF（DDB1-CUL4相关因子）底物受体，将结合的底物定位在由CUL4连接酶臂围绕DDB1旋转运动产生的泛素化区域内，从而建立起允许对进入该催化区域的蛋白质进行非特异性赖氨酸靶向的空间维度。CRBN通过其C端PUA结构域识别包括同源框转录因子MEIS2在内的内源性底物，介导它们的泛素化和降解，从而调控发育基因表达程序和细胞分化。沙利度胺及其衍生物来那度胺和泊马度胺与CRBN C端结构域内的疏水性口袋结合，解离常数约为150至250纳摩尔，通过戊二酰亚胺部分与His380和Trp382的相互作用占据典型的底物识别界面，并与Trp382、Trp388、Trp402和Phe404建立广泛的范德华接触。免疫调节药物（IMiD）与CRBN的结合产生双重相反的作用——一方面阻断内源性底物（如MEIS2）的募集和降解，另一方面形成新的识别界面，募集包括Ikaros家族转录因子IKZF1和IKZF3在内的新底物进行泛素化和降解，这些新底物作为分子胶降解剂，重编程CRL4^CRBN^的底物特异性。来那度胺和泊马度胺中存在的、暴露于溶剂的邻苯二甲酰亚胺C4苯胺官能团（沙利度胺中不存在）直接参与新底物的募集。该位点的修饰通过改变CRBN、结合的IMiD以及含有甘氨酸环（G-loop）识别基序的靶蛋白之间形成的蛋白质-蛋白质相互作用表面，从而调节降解效率。CRBN的自泛素化发生在无结构的N端赖氨酸残基K39和K43处，这种修饰受COP9信号体（CSN）的抑制。IMiD的结合并不阻止CRBN的自泛素化，从而在改变底物特异性的同时维持连接酶活性。该蛋白通过控制大电导钙激活钾（BK）通道的泛素化状态来调节这些通道，进而调节通道组装、神经元表面表达和突触前谷氨酸释放，而这些过程控制着包括记忆和学习在内的认知功能。 CRBN通过与TRAF6和ECSIT相互作用参与Toll样受体4 (TLR4)信号通路，抑制ECSIT泛素化并抑制炎症通路激活。CRBN的功能缺失突变，包括导致419位氨基酸残基后提前终止的无义突变R419X，与常染色体隐性遗传的非综合征型智力障碍相关，这可能是由于BK通道介导的神经元兴奋性调节紊乱以及由于底物结合口袋C端结构元件缺失而导致的底物识别改变所致。CRBN的表达决定了多发性骨髓瘤对基于免疫调节剂（IMiD）疗法的敏感性，CRBN的缺失是一种常见的耐药机制，它通过消除IKZF1和IKZF3降解所需的底物受体而导致来那度胺和泊马度胺疗效降低。该蛋白质在组织中普遍表达，在睾丸、大脑、肾脏和肌肉中表达水平尤其高，并且定位于细胞质中，在那里它与 CRL4 复合物成分组装，以执行空间调控的泛素化事件。

特异性

CRBN Antibody [M9N10] 可检测内源性 CRBN 总蛋白水平。

背景

脑蛋白（CRBN）作为Cullin-RING E3泛素连接酶4（CRL4^CRBN^）复合物中的底物受体发挥作用。该复合物由DDB1、CUL4、RBX1和CRBN组成，介导靶蛋白的泛素化和蛋白酶体降解，从而调节蛋白质稳态、肢体发育、神经元功能和免疫信号传导。CRBN具有三部分结构：N端为Lon蛋白酶样结构域，中央为介导DDB1相互作用的螺旋束结构域，C端为包含假尿苷合酶和古菌苷转糖基酶（PUA）折叠的C端结构域。该C端结构域包含底物识别界面和一个由半胱氨酸残基配位的保守锌结合位点。该蛋白作为DCAF（DDB1-CUL4相关因子）底物受体，将结合的底物定位在由CUL4连接酶臂围绕DDB1旋转运动产生的泛素化区域内，从而建立起允许对进入该催化区域的蛋白质进行非特异性赖氨酸靶向的空间维度。CRBN通过其C端PUA结构域识别包括同源框转录因子MEIS2在内的内源性底物，介导它们的泛素化和降解，从而调控发育基因表达程序和细胞分化。沙利度胺及其衍生物来那度胺和泊马度胺与CRBN C端结构域内的疏水性口袋结合，解离常数约为150至250纳摩尔，通过戊二酰亚胺部分与His380和Trp382的相互作用占据典型的底物识别界面，并与Trp382、Trp388、Trp402和Phe404建立广泛的范德华接触。免疫调节药物（IMiD）与CRBN的结合产生双重相反的作用——一方面阻断内源性底物（如MEIS2）的募集和降解，另一方面形成新的识别界面，募集包括Ikaros家族转录因子IKZF1和IKZF3在内的新底物进行泛素化和降解，这些新底物作为分子胶降解剂，重编程CRL4^CRBN^的底物特异性。来那度胺和泊马度胺中存在的、暴露于溶剂的邻苯二甲酰亚胺C4苯胺官能团（沙利度胺中不存在）直接参与新底物的募集。该位点的修饰通过改变CRBN、结合的IMiD以及含有甘氨酸环（G-loop）识别基序的靶蛋白之间形成的蛋白质-蛋白质相互作用表面，从而调节降解效率。CRBN的自泛素化发生在无结构的N端赖氨酸残基K39和K43处，这种修饰受COP9信号体（CSN）的抑制。IMiD的结合并不阻止CRBN的自泛素化，从而在改变底物特异性的同时维持连接酶活性。该蛋白通过控制大电导钙激活钾（BK）通道的泛素化状态来调节这些通道，进而调节通道组装、神经元表面表达和突触前谷氨酸释放，而这些过程控制着包括记忆和学习在内的认知功能。 CRBN通过与TRAF6和ECSIT相互作用参与Toll样受体4 (TLR4)信号通路，抑制ECSIT泛素化并抑制炎症通路激活。CRBN的功能缺失突变，包括导致419位氨基酸残基后提前终止的无义突变R419X，与常染色体隐性遗传的非综合征型智力障碍相关，这可能是由于BK通道介导的神经元兴奋性调节紊乱以及由于底物结合口袋C端结构元件缺失而导致的底物识别改变所致。CRBN的表达决定了多发性骨髓瘤对基于免疫调节剂（IMiD）疗法的敏感性，CRBN的缺失是一种常见的耐药机制，它通过消除IKZF1和IKZF3降解所需的底物受体而导致来那度胺和泊马度胺疗效降低。该蛋白质在组织中普遍表达，在睾丸、大脑、肾脏和肌肉中表达水平尤其高，并且定位于细胞质中，在那里它与 CRL4 复合物成分组装，以执行空间调控的泛素化事件。

使用信息

抗体应用

WB, IP, FCM

稀释比例

WB	IP	FCM
1:1000	1:30	1:500

反应性

Human, Mouse

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

50 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法

文献参考

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: MOLT-4, Lane 2: Hela, Lane 3: NIH/3T3, Lane 4: C6