CXCL13 Antibody (Rabbit mAb) [E12F15] Datasheet

生物描述

特异性	CXCL13 Antibody (Rabbit mAb) [E12F15] 可检测内源性 CXCL13 总蛋白水平。
背景	CXCL13，最初被鉴定为B细胞趋化因子1 (BCA-1)，属于CXC趋化因子亚家族，通过其单一受体CXCR5发挥作用，形成一条特异性的配体-受体轴，调控淋巴结、脾脏和派氏淋巴集结等次级淋巴器官(SLO)的结构。CXCL13及其受体CXCR5通过触发恶性细胞内的细胞内信号级联反应，并以自分泌或旁分泌的方式调节复杂的肿瘤微环境，从而在这一过程中发挥关键作用。在生理条件下，该轴引导初始B细胞和表达CXCR5的滤泡辅助性T细胞(Tfh)向B细胞滤泡迁移。 CXCL13由滤泡辅助性T细胞、滤泡树突状细胞和边缘网状细胞分泌，它通过高内皮静脉将外周CXCR5阳性B细胞募集到B细胞区或生发中心。在B细胞区或生发中心，CXCL13通过与B细胞和滤泡树突状细胞的正反馈环路促进滤泡发育并维持次级淋巴器官的稳态。配体结合后，受体偶联的异源三聚体G蛋白解离成Gα和Gβγ亚基，启动不同的下游级联反应，将趋化因子梯度转化为定向迁移和细胞骨架重组。 CXCR5 使 B 细胞和 Tfh 细胞能够沿着 CXCL13 梯度向 B 细胞滤泡迁移，从而建立起有效 T 细胞-B 细胞相互作用所需的空间邻近性。由树突状细胞启动的初始 T 细胞会生成 CXCR5 阳性的前 Tfh 细胞，这些细胞沿着 CXCL13 梯度迁移至滤泡，并在滤泡内与相应的 B 细胞相互作用，从而进入滤泡并成熟为完全程序化的 B 细胞辅助细胞。这种定位是产生高亲和力抗体反应的基础，因为 Tfh 细胞是 B 细胞增殖、分化和高亲和力抗体合成的关键参与者，也是生发中心形成和维持所必需的。该轴将适应性免疫组织延伸至非淋巴组织：CXCL13/CXCR5 活性通过在炎症组织（包括中枢神经系统）中形成异位淋巴结构，组织和塑造二级淋巴器官外的适应性 B 细胞相关免疫反应；相应地，CXCL13 被认为在神经炎症期间将 B 细胞募集到脑脊液中。在恶性肿瘤中，受体结合通过募集效应细胞和抑制细胞重塑肿瘤微环境，因此 CXCL13/CXCR5 轴在 B 细胞募集和三级淋巴结构形成中起主导作用，激活针对某些肿瘤的免疫反应；而在大多数癌症类型中，同一轴通过将抑制性免疫细胞募集到肿瘤组织中来介导促肿瘤免疫反应。在发育水平上破坏该轴会产生可测量的结构性后果，因为 CXCL13/CXCR5 缺陷小鼠表现出淋巴结发育不全。相反，该通路过度表达会导致非淋巴组织中形成异位淋巴结构。

特异性

CXCL13 Antibody (Rabbit mAb) [E12F15] 可检测内源性 CXCL13 总蛋白水平。

背景

CXCL13，最初被鉴定为B细胞趋化因子1 (BCA-1)，属于CXC趋化因子亚家族，通过其单一受体CXCR5发挥作用，形成一条特异性的配体-受体轴，调控淋巴结、脾脏和派氏淋巴集结等次级淋巴器官(SLO)的结构。CXCL13及其受体CXCR5通过触发恶性细胞内的细胞内信号级联反应，并以自分泌或旁分泌的方式调节复杂的肿瘤微环境，从而在这一过程中发挥关键作用。在生理条件下，该轴引导初始B细胞和表达CXCR5的滤泡辅助性T细胞(Tfh)向B细胞滤泡迁移。 CXCL13由滤泡辅助性T细胞、滤泡树突状细胞和边缘网状细胞分泌，它通过高内皮静脉将外周CXCR5阳性B细胞募集到B细胞区或生发中心。在B细胞区或生发中心，CXCL13通过与B细胞和滤泡树突状细胞的正反馈环路促进滤泡发育并维持次级淋巴器官的稳态。配体结合后，受体偶联的异源三聚体G蛋白解离成Gα和Gβγ亚基，启动不同的下游级联反应，将趋化因子梯度转化为定向迁移和细胞骨架重组。 CXCR5 使 B 细胞和 Tfh 细胞能够沿着 CXCL13 梯度向 B 细胞滤泡迁移，从而建立起有效 T 细胞-B 细胞相互作用所需的空间邻近性。由树突状细胞启动的初始 T 细胞会生成 CXCR5 阳性的前 Tfh 细胞，这些细胞沿着 CXCL13 梯度迁移至滤泡，并在滤泡内与相应的 B 细胞相互作用，从而进入滤泡并成熟为完全程序化的 B 细胞辅助细胞。这种定位是产生高亲和力抗体反应的基础，因为 Tfh 细胞是 B 细胞增殖、分化和高亲和力抗体合成的关键参与者，也是生发中心形成和维持所必需的。该轴将适应性免疫组织延伸至非淋巴组织：CXCL13/CXCR5 活性通过在炎症组织（包括中枢神经系统）中形成异位淋巴结构，组织和塑造二级淋巴器官外的适应性 B 细胞相关免疫反应；相应地，CXCL13 被认为在神经炎症期间将 B 细胞募集到脑脊液中。在恶性肿瘤中，受体结合通过募集效应细胞和抑制细胞重塑肿瘤微环境，因此 CXCL13/CXCR5 轴在 B 细胞募集和三级淋巴结构形成中起主导作用，激活针对某些肿瘤的免疫反应；而在大多数癌症类型中，同一轴通过将抑制性免疫细胞募集到肿瘤组织中来介导促肿瘤免疫反应。在发育水平上破坏该轴会产生可测量的结构性后果，因为 CXCL13/CXCR5 缺陷小鼠表现出淋巴结发育不全。相反，该通路过度表达会导致非淋巴组织中形成异位淋巴结构。

使用信息

抗体应用

IHC

稀释比例

IHC

1:500

反应性

Mouse

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

13 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
IHC	实验步骤：脱蜡/补液 1. 脱蜡/水合切片： 2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。 3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。 4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。 5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。 2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。 3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。 5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。 6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。 7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。 9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。 11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。 12. 将载玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用苏木精复染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。 16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

实验方法

IHC

实验步骤：

脱蜡/补液

1. 脱蜡/水合切片：

2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。

3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。

4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。

5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。

2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。

3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。

5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。

6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。

7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。

9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。

11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。

12. 将载玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用苏木精复染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。

16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

文献参考

Application Data

IHC

Validated by Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded mouse spleen tissue with F9472 at 1:500 dilution.