CXCL13 Antibody (Rabbit mAb) [N2C21]

目录号：F9578

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生物描述

特异性 CXCL13 Antibody (Rabbit mAb) [N2C21] 可检测内源性 CXCL13 总蛋白水平。
背景 CXCL13，最初被鉴定为B细胞趋化因子1 (BCA-1)，属于CXC趋化因子亚家族，通过其单一的同源受体CXCR5发挥作用，形成一条特异性的配体-受体轴，调控淋巴结、脾脏和派氏淋巴集结等次级淋巴器官(SLO)的结构。次级淋巴器官内的滤泡树突状细胞、基质细胞和边缘网状细胞持续分泌CXCL13，建立趋化梯度，引导初始B细胞和表达CXCR5的滤泡辅助性T细胞(Tfh)向B细胞滤泡迁移。受体结合触发异源三聚体G蛋白偶联信号通路，该通路通过鸟嘌呤核苷酸交换因子DOCK2和磷脂酰肌醇-3激酶δ激活Rac GTP酶通路，进而驱动F-肌动蛋白聚合和定向细胞迁移；这两个通路以互补的方式发挥作用，因为单独破坏其中任何一个通路只会部分影响B细胞进入滤泡，而两者同时缺失则会完全阻断滤泡进入。在滤泡内，CXCR5与整合素LFA-1及其配体ICAM-1协同作用，维持B细胞对滤泡树突状细胞网络的监视。随后，B细胞受体结合通过将CXCR5分离到免疫突触的外周来重塑这种迁移行为，从而将抗原识别与持续的位置控制相结合。这种空间上的协调使B细胞能够与Tfh细胞进行有效的相互作用，从而支持生发中心的形成、免疫球蛋白亲和力的成熟以及长期体液免疫记忆的建立。生理相关性体现在B细胞和滤泡树突状细胞之间的正反馈环路，该环路可增强滤泡发育并维持二级淋巴器官的稳态。CXCL13/CXCR5信号通路的激活促进三级淋巴结构的形成，并且根据肿瘤微环境的不同，可介导保护性抗肿瘤免疫激活或将免疫抑制细胞群募集到肿瘤微环境中。而在自身免疫和神经炎症环境下，该通路的慢性激活则驱动异位B细胞募集，包括在中枢神经系统炎症期间迁移至脑脊液。

使用信息

抗体应用 IHC 稀释比例
IHC
1:1000
反应性 Human
抗体类型 Rabbit Monoclonal Antibody MW 13 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

Application Data

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human tonsil tissue with F9578 at 1:1000 dilution.