E.coli LPS Antibody [M15H2]

目录号：F1681

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生物描述

特异性 E.coli LPS Antibody [M15H2] 可特异性检测 E.coli LPS 水平。
背景 大肠杆菌脂多糖 (LPS) 是革兰氏阴性菌外膜的主要结构成分和强效内毒素，由脂质 A、核心寡糖和 O 抗原组成，它们共同维持膜的完整性，同时也是已知最强的免疫刺激分子。脂质 A 是一种双磷酸化的 β-1',6-葡萄糖胺二糖，其上酰化有六条脂肪酸链，形成毒性部分，可被宿主 TLR4-MD-2-CD14 受体复合物识别。核心区域通过带有带电荷的磷酸/乙醇胺基团的 Kdo-庚糖连接，从而稳定膜结构。高度可变的 O 抗原多糖链由重复的表位组成，赋予血清型特异性，并通过吞噬作用/补体抵抗来逃避免疫反应，使细菌呈现“光滑”的形态。 LPS 形成重要的渗透屏障，保护机体免受胆汁酸、抗生素和阳离子肽的侵害，同时通过 MyD88/TRIF 依赖的 NF-κB 和 IRF3 通路触发灾难性的先天免疫激活，驱动大量的 TNF-α、IL-1β、IL-6 细胞因子风暴，从而在革兰氏阴性菌血症期间引发脓毒性休克、弥散性血管内凝血和多器官衰竭；肠道移位引起的慢性低度内毒素血症通过持续的血管炎症导致动脉粥样硬化、神经退行性疾病和代谢综合征，这使得 LPS 既是不可或缺的细菌结构元素，也是人类最危险的微生物毒素。

使用信息

抗体应用 IF, ELISA 稀释比例
IF
1:200
反应性 Escherichia coli
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IF
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
 
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
 
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
 
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
 
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
 

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