Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC)

目录号：S6928 批次号：S692801

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化学数据

化学结构式 别名 Fluorescein isothiocyanate isomer I, 5-FITC 储存条件
(自收到货起)		 3年 -20°C(避光) 粉状
化学式

C21H11NO5S
分子量 389.38 CAS号 3326-32-7
Solubility (25°C)* 体外 DMSO 78 mg/mL (200.31 mM)
Ethanol 10 mg/mL (25.68 mM)
Water Insoluble
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

制备储备液

生物活性

产品描述 Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC, Fluorescein isothiocyanate isomer I, 5-FITC) 是一种能够与组织和蛋白质结合的荧光探针。
体外研究

1.蛋白质制备
1) 为了获得最佳标记效果，请配制蛋白（抗体）浓度为2 mg/mL。
2) 蛋白质溶液的pH值为8.5±0.5。 pH值低于8.0时，用1m碳酸氢钠调节。
3）如果蛋白浓度低于2mg/ml，标记效率会大大降低。 为了获得最佳的标记效率，建议最终蛋白浓度范围为2-10 mg/mL。
4) 蛋白缓冲液中必须不含伯胺（如Tris或甘氨酸）和铵离子，否则会影响标记效率。
2.染料制备
将无水 DMSO 添加到 FITC 瓶中，制成 10 mM 储备溶液。 通过移液或涡旋充分混合。
3.染料用量的计算
反应所需FITC的量取决于待标记蛋白的量，FITC与蛋白的最佳摩尔比约为10。
示例：假设所需标记蛋白为 1 mL 2 mg/mL IgG（MW=150,000），用 1 mL DMSO 溶解 1 mg FITC，则所需 FITC 体积为 40 μL。
4.进行缀合反应
1) 将大量新鲜制备的 10 mg/mL FITC 缓慢添加到 0.5 mL 蛋白质样品中。 在溶液中，轻轻摇动混合，然后短暂离心，将样品收集在反应管底部。 请勿充分混匀，以免蛋白质样品变性、失活。
2）将反应管置于暗处，室温下轻轻孵育，间隔60分钟。10-15分钟，轻轻翻转反应管数次，使两种反应物充分混合，提高棒效。
5.纯化结合体
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱纯化染料-蛋白质缀合物的示例。
1) 根据生产说明书准备Sephadex G-25柱。
2) 将反应混合物（来自“运行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 柱的顶部。
3) 当样品刚好流到顶部树脂表面下方时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
4) 向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。
合并含有所需染料-蛋白质缀合物的级分。

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC)在文献中得到引用

Circular RNA circ-MMP11 Contributes to Lapatinib Resistance of Breast Cancer Cells by Regulating the miR-153-3p/ANLN Axis [ Front Oncol, 2021, 11:639961] PubMed: 34295807

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