Giantin (Golgi Marker) Antibody [F5N17]

目录号：F1556

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生物描述

特异性 Giantin (Golgi Marker) Antibody [F5N17] 可检测内源性 Giantin (Golgi Marker) 总蛋白水平。
背景 巨蛋白（GOLGB1），又称巨蛋白高尔基体蛋白，是哺乳动物中最大的高尔基体蛋白，属于长链卷曲螺旋蛋白家族，主要定位于顺式/中间高尔基体，是高尔基体完整性的关键结构标志物。巨蛋白由延伸的棒状卷曲螺旋胞质结构域、C端跨膜锚定区以及与p115、GM130、GRASP65、Rab1和SNARE等蛋白相互作用的基序组成，使其无需依赖特定的关键残基即可锚定囊泡。它通过抑制堆叠和囊泡之间的过度融合和相互连接来调节高尔基体的结构，确保形成用于顺序糖基化的离散反应区室。 Giantin基因敲除会导致胞外孔大小和数量减少、膜蛋白扩散加速以及胞内囊泡连接性增强，从而减缓高尔基体内的运输并影响蛋白质和脂质的糖基化。在生物学上，Giantin将COPI囊泡锚定在顺式高尔基体上，通过与衣壳蛋白形成复合物促进内质网-高尔基体和高尔基体内的运输，并在有丝分裂后或被布雷菲德菌素A或乙醇等物质破坏后支持高尔基体的重组。它协调表面蛋白和溶酶体蛋白分选的分泌途径，其缺失会改变糖基化模式和货物动力学。相关疾病包括先天性糖基化障碍（CDG）、结缔组织疾病、纤毛病（由动力蛋白-2定位异常引起）以及由于运输缺陷导致的分泌障碍。

使用信息

抗体应用 IF 稀释比例
IF
1:200-1:400
反应性 Human
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IF
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
 
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
 
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
 
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
 
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
 

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