Glutathione Antibody [A11G7] Datasheet

生物描述

特异性	Glutathione Antibody [A11G7] 可检测内源性 Glutathione 总蛋白水平。
背景	谷胱甘肽 (GSH) 是一种低分子量三肽硫醇抗氧化剂，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，通过谷氨酸-半胱氨酸连接酶和谷胱甘肽合成酶催化的两个连续的 ATP 依赖性步骤合成。它主要以还原态 (GSH) 和氧化态二硫化物 (GSSG) 的形式存在，两者相互转化以调节细胞的氧化还原平衡。GSH 具有独特的 γ-谷氨酰肽键，该肽键连接谷氨酸的 γ-羧基和半胱氨酸的氨基，使其能够抵抗 γ-谷氨酰环转移酶和大多数肽酶的降解；半胱氨酸的硫醇基 (-SH) 作为氧化还原反应的亲核中心，而甘氨酸则稳定 C 端。谷胱甘肽 (GSH) 通过硫醇-二硫键交换直接清除活性氧和活性氮 (ROS/RNS)，作为谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx) 的必需还原剂，GPx 可解毒过氧化物（谷胱甘肽还原酶利用 NADPH 将 GSSG 还原回 GSH），并通过谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 与亲电性外源物质、重金属和内源性毒素结合，进行 II 期解毒和巯基尿酸输出。这些过程维持蛋白质巯基稳态，支持 Nrf2 驱动的抗氧化基因表达，促进铁硫簇组装和金属转运，并调节 NF-κB 等信号通路。GSH 耗竭与氧化应激相关疾病密切相关，包括帕金森病、肝硬化、癌症、糖尿病和早衰。

特异性

Glutathione Antibody [A11G7] 可检测内源性 Glutathione 总蛋白水平。

背景

谷胱甘肽 (GSH) 是一种低分子量三肽硫醇抗氧化剂，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，通过谷氨酸-半胱氨酸连接酶和谷胱甘肽合成酶催化的两个连续的 ATP 依赖性步骤合成。它主要以还原态 (GSH) 和氧化态二硫化物 (GSSG) 的形式存在，两者相互转化以调节细胞的氧化还原平衡。GSH 具有独特的 γ-谷氨酰肽键，该肽键连接谷氨酸的 γ-羧基和半胱氨酸的氨基，使其能够抵抗 γ-谷氨酰环转移酶和大多数肽酶的降解；半胱氨酸的硫醇基 (-SH) 作为氧化还原反应的亲核中心，而甘氨酸则稳定 C 端。谷胱甘肽 (GSH) 通过硫醇-二硫键交换直接清除活性氧和活性氮 (ROS/RNS)，作为谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx) 的必需还原剂，GPx 可解毒过氧化物（谷胱甘肽还原酶利用 NADPH 将 GSSG 还原回 GSH），并通过谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 与亲电性外源物质、重金属和内源性毒素结合，进行 II 期解毒和巯基尿酸输出。这些过程维持蛋白质巯基稳态，支持 Nrf2 驱动的抗氧化基因表达，促进铁硫簇组装和金属转运，并调节 NF-κB 等信号通路。GSH 耗竭与氧化应激相关疾病密切相关，包括帕金森病、肝硬化、癌症、糖尿病和早衰。

使用信息

抗体应用

IF, FCM

稀释比例

IF	FCM
1:200	1:250

反应性

抗体类型

Mouse Monoclonal Antibody

MW

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
IF	实验步骤：样品准备 1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。 2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。 3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。 4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。固定 1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。通透 1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。） 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。封闭添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。免疫荧光染色（第一天） 1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。 2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。免疫荧光染色（第二天） 1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。 3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。 5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。封片 1. 抗荧光淬灭封片剂封片。 2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。 3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

实验方法

IF

实验步骤：

样品准备

1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。

2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。

3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。

4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。

固定

1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

通透

1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。

（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

封闭

添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）

注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。

免疫荧光染色（第一天）

1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。

2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。

免疫荧光染色（第二天）

1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。

3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。

5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。

封片

1. 抗荧光淬灭封片剂封片。

2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。

3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

文献参考

Application Data

IF

Validated by Selleck

Immunofluorescent analysis of A549 cells using F1643 (green, 1:100), Hoechst (blue) and tubulin (Red).