HOXA5 Antibody [C16C3] Datasheet

生物描述

特异性	HOXA5 Antibody [C16C3] 可检测内源性 HOXA5 总蛋白水平。
背景	HOXA5属于HOX家族的同源异型盒转录因子，在胚胎发育过程中沿前后轴建立位置身份。该蛋白具有一个保守的60个氨基酸残基的同源异型结构域，该结构域包含三个α螺旋，可结合特定的DNA序列；其两侧分别连接N端转录激活结构域和C端六肽基序，用于辅助因子相互作用。HOXA5的表达模式调控颈胸过渡，在体节、侧板中胚层、肺、肾、脊髓和发育中的肌肉骨骼组织中动态出现。在器官发生过程中，HOXA5通过调控生骨节分化为软骨细胞、成骨细胞和软骨膜来指导骨骼模式形成，同时还塑造肋骨、椎骨、胸骨和前肢带。 HOXA5通过与PDGFRα共定位，促进肺泡肌成纤维细胞的分化，驱动弹性蛋白沉积和肺间隔形成，这对肺成熟至关重要。表达HOXA5的细胞参与肌腱、韧带和真皮的形成，影响软骨前体凝聚体的粘附和形态发生。HOXA5激活Pax1等基因以促进肩峰发育，并抑制其他基因以精细调控椎骨特性和膈肌形成。HOXA5通过抑制WNT2B和NFATC1来调节Wnt/β-catenin信号通路，并通过上调FABP4和抑制PKA/HSL促进脂肪细胞分化。在组织重塑过程中，HOXA5与TGF-β信号通路相互作用，增强抗炎信号并抑制巨噬细胞浸润脂肪组织。 HOXA5 缺失与肺部肿瘤发生相关，其机制是通过损害 p53 介导的细胞凋亡和增殖调控；而 HOXA5 表达恢复则可抑制肿瘤转移。Hoxa5 基因敲除小鼠由于气管食管间隔发育不良而出现呼吸衰竭，并伴有颅面畸形和雌性生殖道畸形。HOXA5 基因异常沉默与肥厚性肥胖、胰岛素抵抗和慢性炎症相关，其机制是通过脂肪生成失调。

特异性

HOXA5 Antibody [C16C3] 可检测内源性 HOXA5 总蛋白水平。

背景

HOXA5属于HOX家族的同源异型盒转录因子，在胚胎发育过程中沿前后轴建立位置身份。该蛋白具有一个保守的60个氨基酸残基的同源异型结构域，该结构域包含三个α螺旋，可结合特定的DNA序列；其两侧分别连接N端转录激活结构域和C端六肽基序，用于辅助因子相互作用。HOXA5的表达模式调控颈胸过渡，在体节、侧板中胚层、肺、肾、脊髓和发育中的肌肉骨骼组织中动态出现。在器官发生过程中，HOXA5通过调控生骨节分化为软骨细胞、成骨细胞和软骨膜来指导骨骼模式形成，同时还塑造肋骨、椎骨、胸骨和前肢带。 HOXA5通过与PDGFRα共定位，促进肺泡肌成纤维细胞的分化，驱动弹性蛋白沉积和肺间隔形成，这对肺成熟至关重要。表达HOXA5的细胞参与肌腱、韧带和真皮的形成，影响软骨前体凝聚体的粘附和形态发生。HOXA5激活Pax1等基因以促进肩峰发育，并抑制其他基因以精细调控椎骨特性和膈肌形成。HOXA5通过抑制WNT2B和NFATC1来调节Wnt/β-catenin信号通路，并通过上调FABP4和抑制PKA/HSL促进脂肪细胞分化。在组织重塑过程中，HOXA5与TGF-β信号通路相互作用，增强抗炎信号并抑制巨噬细胞浸润脂肪组织。 HOXA5 缺失与肺部肿瘤发生相关，其机制是通过损害 p53 介导的细胞凋亡和增殖调控；而 HOXA5 表达恢复则可抑制肿瘤转移。Hoxa5 基因敲除小鼠由于气管食管间隔发育不良而出现呼吸衰竭，并伴有颅面畸形和雌性生殖道畸形。HOXA5 基因异常沉默与肥厚性肥胖、胰岛素抵抗和慢性炎症相关，其机制是通过脂肪生成失调。

使用信息

抗体应用

WB

稀释比例

WB

1:1000 - 1:10000

反应性

Human

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

29 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 60 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 60 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: 293T, Lane 2: SH-SY5Y, Lane 3: Caco-2