Human CD3+ Cell lsolation Kit

目录号：Q0001

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产品描述

产品介绍

人CD3细胞分选试剂盒用于从外周血、支气管灌洗液、细胞培养物或各类组织（如淋巴组织、鼻组织及肿瘤组织）中阳性分选或去除CD3+ T细胞。

应用范围

● 阳性分选或去除表达人CD3抗原的细胞。

● 从外周血单个核细胞（PBMCs）、体液（如支气管灌洗液）或组织单细胞悬液（如淋巴组织和肿瘤组织）中分离或去除T细胞。
 
组分
Anti-human CD3微珠：Anti-human CD3抗体和微珠通过共价偶联结合，分散在含有稳定剂和0.05%叠氮化钠的缓冲溶液中。
 
储存条件
-20℃避光保存，避免反复冻融。
 
分选柱
阳性分选：MS, LS, XS Columns
清除分选：LD, D Columns
 
背景信息
CD3 在所有 T 细胞和 CD56+ NKT 细胞上表达，并与 T 细胞受体结合。70% 至 80% 的人类外周血淋巴细胞和 65% 至 85% 的胸腺细胞为 CD3+。CD3 微珠识别的表位位于 CD3ε 链上。

实验步骤

实验前准备

缓冲液配制： PBS缓冲液（pH 7.2）包括0.5%的BSA和2 mM EDTA，需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌。

 
实验步骤

1. 细胞准备： 准备新鲜的PBMC或液氮冻存的PBMC，调整细胞密度为1×108 cells/mL。
2. CD3微珠标记：每107细胞中加入 10 µL CD3微珠，混匀后 4 ℃孵育15 min，每隔5 min轻弹混匀，避免细胞聚集。
注意： 分选更多细胞时，按比例增加CD3微珠用量（如分选5×107细胞，需在500 μL细胞悬液中加入50 μL CD3微珠）。
3. 洗涤细胞：孵育完成后，加入1 mL分选buffer（避免剧烈振荡或上下颠倒混匀）。300 g离心3 min，弃上清，加入1 mL分选buffer重悬细胞。
4. 磁珠分选：
将分选柱置于MACS分离器的磁场中，用缓冲液冲洗分选柱（MS柱： 500 μL；LS柱： 3 mL）。
将细胞悬液加入分选柱，收集未标记的流经细胞（可选），再用分选液清洗分选柱（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
5. 收集CD3阳性细胞：移出分选柱，加入适量缓冲液，用柱塞快速冲洗，收集磁性标记的CD3阳性细胞（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
注意： 每次液体完全流尽后再进行下一步操作。
6. （可选）二次富集： 若需更高纯度，可重复步骤4-5，在第二个分选柱上再次富集CD3阳性细胞。
实验全程保持低温（4℃），动作迅速以减少细胞损伤。