Human CD4+ Cell lsolation Kit

目录号：Q0002

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产品描述

产品介绍：

人CD4细胞分选试剂盒通过直接磁性标记实现CD4+细胞的阳性分选或去除，最常用细胞来源为外周血、白细胞分离产物[1]及脐带血。此外，辅助性T细胞亦可从淋巴结、胸腺、脾脏、皮肤活检组织、滑膜液及细胞培养物中分离。

应用范围：

● 从外周血、白细胞分离产物、脐带血、淋巴结、胸腺、脾脏、皮肤活检样本、滑膜液、支气管灌洗液或细胞培养物中阳性分选或去除CD4+ T细胞。

● 对CD4+ T细胞进行功能研究，如增殖或细胞毒性实验。

● CD4+ T细胞的体外培养以评估细胞因子产生。

● 将CD4+ T细胞与树突状细胞或B细胞共培养，以评估抗原呈递细胞的激活。

● 用于HIV研究的多种应用，例如：体外用HIV感染细胞、评估HIV感染的滤泡树突状细胞的传染性、评估抗病毒治疗后免疫重建情况，以及监测HIV感染母亲所生子女的免疫系统异常。

组分：

Anti-human CD4微珠：Anti-human CD4抗体和微珠通过共价偶联结合，分散在含有稳定剂和0.05%叠氮化钠的缓冲溶液中。

储存条件：

-20℃避光保存，避免反复冻融。

分选柱：

阳性分选：MS, LS, XS Columns

清除分选：LD, D Columns

背景信息：

CD4 是 CD4+ T 辅助细胞上的 TCR 异二聚体识别 MHC II 类/肽复合物的辅助分子。CD4 在辅助 T 细胞上表达，在单核细胞和树突状细胞上的表达水平较低。CD4 分子是人类免疫缺陷病毒 (HIV) 的受体。CD4 抗体可识别大多数胸腺细胞和约 65% 的外周血 T 细胞。

实验步骤

实验前准备

缓冲液配制： PBS缓冲液（pH 7.2）包括0.5%的BSA和2 mM EDTA，需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌。

实验步骤

1. 细胞准备： 准备新鲜的PBMC或液氮冻存的PBMC，调整细胞密度为1×10⁸ cells/mL。
2. CD4微珠标记：每10⁷细胞中加入 10 µL CD4微珠，混匀后 4 ℃孵育15 min，每隔5 min轻弹混匀，避免细胞聚集。
注意：分选更多细胞时，按比例增加CD4微珠用量（如分选5×10⁷细胞，需在500 μL细胞悬液中加入50 μL CD4微珠）。
3. 洗涤细胞：孵育完成后，加入1 mL分选buffer（避免剧烈振荡或上下颠倒混匀）。300 g离心3 min，弃上清，加入1 mL分选buffer重悬细胞。
4. 磁珠分选：
将分选柱置于MACS分离器的磁场中，用缓冲液冲洗分选柱（MS柱： 500 μL；LS柱： 3 mL）。
将细胞悬液加入分选柱，收集未标记的流经细胞（可选），再用分选液清洗分选柱（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
5. 收集CD4阳性细胞：移出分选柱，加入适量缓冲液，用柱塞快速冲洗，收集磁性标记的CD4阳性细胞（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
注意：每次液体完全流尽后再进行下一步操作。
6. （可选）二次富集： 若需更高纯度，可重复步骤4-5，在第二个分选柱上再次富集CD4阳性细胞。
实验全程保持低温（4℃），动作迅速以减少细胞损伤。