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产品描述
产品介绍
人 CD8 无柱解离式阳性分选试剂盒适用于从人外周血单个核细胞（PBMC）中分选出 CD8+ 细胞。
应用范围
人 CD8 无柱解离式阳性分选试剂盒适用于从新鲜分离的人 PBMC 或冻存的人 PBMC 中分选出 CD8+ 细胞。原理是利用 CD8 抓取抗体对 CD8+ 细胞进行标记，然后通过可解离磁珠对目标细胞进行捕获，再用解离液将磁珠从细胞表面解离，从而得到无磁珠标记的人 CD8+ 细胞。分选得到的 CD8+ 细胞可应用于下游的分子生物学和细胞生物学实验。
组分：
CD8 抓取抗体(200 μL)；
可解离磁珠（2 mL）；
10× 解离液（4 mL）。
储存条件
4°C储存。
安全信息
仅供研究使用。不用于任何动物或人类的治疗或诊断用途。
实验步骤
实验前准备
缓冲液：PBS 缓冲液（pH 7.2）包括 0.5% 的 BSA 和 2 mM EDTA，需预先通过 0.22 μm 滤膜过滤除菌
实验步骤
实验过程要快，全程保持细胞低温。
1.准备新鲜的 PBMC 或者液氮冻存复苏的 PBMC，调整细胞密度为 1×108 cells/mL；
2.每 107 细胞中加入 2 μL CD8 抓取抗体，混匀后 4 ℃ 孵育15 min。每隔 5 min 敲打混匀；
3.取 20 μL 可解离磁珠, 用缓冲液清洗 2 遍后，重新用 20 μL 缓冲液重悬。随后加入步骤 2 中；
注意：如果分选更多细胞，则按比例增加 CD8 抓取抗体以及可解离磁珠的用量。例如分选 5×107 细胞，则应在 500 μL 细胞悬液中加入 10 μL CD8 抓取抗体以及 100 μL 可解离磁珠。
4.孵育完成后，加入 1 mL 缓冲液（避免剧烈振荡或者上下颠倒混匀）并转移到流式管中，再加入 1.3 mL 的缓冲液。将流式管放在流式管磁力架上静置 3 min。将上清液轻轻倒入 2 mL 离心管中（可选择）；
5.再将流式管从磁力架上取下，迅速加入 2 mL 缓冲液，用移液器反复吹打分散磁珠。将流式管放在流式管磁力架上静置 3 min。吸出并丢弃上清液；
6.重复步骤 5 两次；
7.磁吸结束后，吸出并丢弃上清液。将流式管从磁力架上取下，迅速加入 200 μL 解离液（用缓冲液将 10× 解离液稀释 10 倍）重悬磁珠，避免磁珠干燥，将磁珠悬液转移至 1.5 mL 离心管中，室温旋转孵育 10 min；
注意：分选其它数量细胞时可则按比例调整解离液的用量
8.孵育完成后，加入 1 mL 的缓冲液，吹打混匀，并转移到流式管中，再加入 1.3 mL 的缓冲液。将流式管放在流式管磁力架上静置 3 min；
9.将上清液转移到一个 15 mL 离心管中备用（上清中含有目的细胞，不要丢弃）。迅速加入 200 μL 解离液（用缓冲液将 10× 解离液稀释 10 倍）重悬磁珠，避免磁珠干燥，将磁珠悬液转移至 1.5 mL 离心管中，室温旋转孵育 10 min；
10.孵育完成后，加入 1 mL 的缓冲液，吹打混匀，并转移到流式管中，再加入 1.3 mL 的缓冲液。将流式管放在流式管磁力架上静置 3 min；
11.将上清液与第一次洗脱后的细胞上清液混合，500 g，离心 5 min，弃上清，即可收集到无磁珠标记的 CD8+ 细胞。
12. 根据实验需要洗涤细胞后，将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中，可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。