Human CD8+ Cell lsolation Kit

目录号：Q0003

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产品描述

产品介绍：

人CD8细胞分选试剂盒用于从不同来源（主要为外周血与脐带血）中阳性分选或去除人类细胞毒性CD8+ T细胞。该产品还可用于分离淋巴结、胸腺、皮肤活检及脾脏中的细胞毒性T细胞。

应用范围：

● 从外周血、脐带血、淋巴结、胸腺、皮肤活检样本和脾脏中阳性分选或去除细胞毒性T细胞。

● 分离细胞毒性T细胞用于进一步功能研究，如增殖实验、细胞毒性实验及体外细胞因子产生分析。

● 从人外周血单个核细胞（PBMCs）中去除CD8+ T细胞，用于SCID小鼠的免疫重建实验。

组分：

Anti-human CD8微珠：Anti-human CD8抗体和微珠通过共价偶联结合，分散在含有稳定剂和0.05%叠氮化钠的缓冲溶液中。

储存条件：

-20℃避光保存，避免反复冻融。

分选柱：

阳性分选：MS, LS, XS Columns

清除分选：LD, D Columns

背景信息：

CD8 抗原与 T 细胞受体形成复合物，并作为辅助分子在 CD8+ 细胞毒性 T 细胞上的 TCR 异二聚体识别 MHC I 类/肽复合物的过程中发挥作用。CD8 分子由 α/β 异二聚体或 α/α 同二聚体组成。它在细胞毒性 T 细胞上表达强烈，在部分 NK 细胞上表达较弱。CD8 存在于大多数胸腺细胞和约三分之一的外周血 T 细胞中。CD8+ 细胞毒性 T 细胞在杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞方面发挥重要作用。

实验步骤

实验前准备

缓冲液配制： PBS缓冲液（pH 7.2）包括0.5%的BSA和2 mM EDTA，需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌。

实验步骤

1. 细胞准备： 准备新鲜的PBMC或液氮冻存的PBMC，调整细胞密度为1×10⁸ cells/mL。
2. CD8微珠标记：每10⁷细胞中加入 10 µL CD8微珠，混匀后 4 ℃孵育15 min，每隔5 min轻弹混匀，避免细胞聚集。
注意：分选更多细胞时，按比例增加CD8微珠用量（如分选5×10⁷细胞，需在500 μL细胞悬液中加入50 μL CD8微珠）。
3. 洗涤细胞：孵育完成后，加入1 mL分选buffer（避免剧烈振荡或上下颠倒混匀）。300 g离心3 min，弃上清，加入1 mL分选buffer重悬细胞。
4. 磁珠分选：
将分选柱置于MACS分离器的磁场中，用缓冲液冲洗分选柱（MS柱： 500 μL；LS柱： 3 mL）。
将细胞悬液加入分选柱，收集未标记的流经细胞（可选），再用分选液清洗分选柱（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
5. 收集CD8阳性细胞：移出分选柱，加入适量缓冲液，用柱塞快速冲洗，收集磁性标记的CD8阳性细胞（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
注意：每次液体完全流尽后再进行下一步操作。
6. （可选）二次富集： 若需更高纯度，可重复步骤4-5，在第二个分选柱上再次富集CD8阳性细胞。
实验全程保持低温（4℃），动作迅速以减少细胞损伤。