IκB-ζ Antibody (Rabbit mAb) [K24D5] Datasheet

生物描述

特异性	IκB-ζ Antibody (Rabbit mAb) [K24D5] 可检测内源性 IκB-ζ 总蛋白水平。
背景	IκB-ζ（也称为MAIL/INAP）是IκB家族中一个非典型成员，由NFKBIZ基因编码。其功能定位为核转录调节因子，整合Toll样受体和白细胞介素-1受体信号通路，并调控免疫组织和屏障组织中NF-κB依赖性基因的选择性表达。IκB-ζ的C端包含一系列锚蛋白重复序列，优先结合NF-κB亚基，例如p50和p52。其N端调控区包含磷酸化和相互作用基序，这些基序能够响应上游信号调节其稳定性和转录调控能力。 IκB-ζ 的表达在 MyD88 依赖的 TLR 和 IL-1R 通路下游被诱导，其机制是通过 IRAK1/IRAK4 和 TRAF6 依赖的模块促进 NF-κB 介导的 Nfkbiz 转录，并通过一种独特的转录后机制，利用 IκB-ζ mRNA 中特定的调控元件增强活化巨噬细胞和其他固有免疫细胞中 IκB-ζ 的 mRNA 积累。IκB-ζ 与 NF-κB 复合物结合于含 κB 启动子上，并作为转录共调节因子发挥作用，诱导一部分二级反应基因的表达，包括促炎介质如白细胞介素-6 和其他晚期 NF-κB 靶基因，同时抑制或减弱另一部分 NF-κB 反应基因的表达，从而塑造启动子和环境特异性的转录输出，并在共同的上游信号下游建立差异化的基因表达谱。在B细胞中，IκB-ζ的诱导发生在B细胞受体和TLR激活之后，并依赖于NF-κB驱动的转录以及mRNA的稳定性。IκB-ζ支持IL-10和CTLA4等免疫调节基因的表达，促进最佳增殖反应，并在TLR刺激下抑制表面共刺激分子的上调，表明其在适应性免疫系统的激活和耐受平衡中发挥作用。IκB-ζ作为炎症信号传导的核心节点，在染色质水平上作为NF-κB在特定启动子上的辅助因子发挥作用；整合控制其转录和mRNA稳定性的平行信号输入；并对巨噬细胞、上皮细胞和B细胞中的炎症基因网络进行时间调控。这使其成为细胞如何响应持续性或联合的先天性和适应性刺激的关键决定因素。 IκB-ζ 表达或功能失调会导致慢性炎症状态和癌症，在某些淋巴瘤或实体瘤环境中，组成型 NF-κB 活性依赖于 IκB-ζ 来维持致病性转录程序，并且 IκB-ζ 水平升高或异位表达与生存率提高、炎症介质产生或组织稳态改变相关。

特异性

IκB-ζ Antibody (Rabbit mAb) [K24D5] 可检测内源性 IκB-ζ 总蛋白水平。

背景

IκB-ζ（也称为MAIL/INAP）是IκB家族中一个非典型成员，由NFKBIZ基因编码。其功能定位为核转录调节因子，整合Toll样受体和白细胞介素-1受体信号通路，并调控免疫组织和屏障组织中NF-κB依赖性基因的选择性表达。IκB-ζ的C端包含一系列锚蛋白重复序列，优先结合NF-κB亚基，例如p50和p52。其N端调控区包含磷酸化和相互作用基序，这些基序能够响应上游信号调节其稳定性和转录调控能力。 IκB-ζ 的表达在 MyD88 依赖的 TLR 和 IL-1R 通路下游被诱导，其机制是通过 IRAK1/IRAK4 和 TRAF6 依赖的模块促进 NF-κB 介导的 Nfkbiz 转录，并通过一种独特的转录后机制，利用 IκB-ζ mRNA 中特定的调控元件增强活化巨噬细胞和其他固有免疫细胞中 IκB-ζ 的 mRNA 积累。IκB-ζ 与 NF-κB 复合物结合于含 κB 启动子上，并作为转录共调节因子发挥作用，诱导一部分二级反应基因的表达，包括促炎介质如白细胞介素-6 和其他晚期 NF-κB 靶基因，同时抑制或减弱另一部分 NF-κB 反应基因的表达，从而塑造启动子和环境特异性的转录输出，并在共同的上游信号下游建立差异化的基因表达谱。在B细胞中，IκB-ζ的诱导发生在B细胞受体和TLR激活之后，并依赖于NF-κB驱动的转录以及mRNA的稳定性。IκB-ζ支持IL-10和CTLA4等免疫调节基因的表达，促进最佳增殖反应，并在TLR刺激下抑制表面共刺激分子的上调，表明其在适应性免疫系统的激活和耐受平衡中发挥作用。IκB-ζ作为炎症信号传导的核心节点，在染色质水平上作为NF-κB在特定启动子上的辅助因子发挥作用；整合控制其转录和mRNA稳定性的平行信号输入；并对巨噬细胞、上皮细胞和B细胞中的炎症基因网络进行时间调控。这使其成为细胞如何响应持续性或联合的先天性和适应性刺激的关键决定因素。 IκB-ζ 表达或功能失调会导致慢性炎症状态和癌症，在某些淋巴瘤或实体瘤环境中，组成型 NF-κB 活性依赖于 IκB-ζ 来维持致病性转录程序，并且 IκB-ζ 水平升高或异位表达与生存率提高、炎症介质产生或组织稳态改变相关。

使用信息

抗体应用

WB, IP, ChIP

稀释比例

WB	IP	ChIP
1:1000	1:50	1:50

反应性

Mouse

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

78 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: Raw 264.7, Lane 2: Raw 264.7 (LPS, 1 μg/ml, 4 h)