IL-18 Rα/IL-1 R5 Antibody (Mouse mAb) [F14H3]

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生物描述

特异性 IL-18 Rα/IL-1 R5 Antibody (Mouse mAb) [F14H3] 可检测内源性 IL-18 Rα/IL-1 R5 总蛋白水平。
背景 IL-18 Rα（也称为 IL-18R1、IL-1 R5 或 IL-1Rrp）是 IL-1 受体/Toll 样受体超家族中异二聚体 IL-18 受体复合物的配体结合链，它与 IL-18Rβ（IL-18RAP/IL-1 R7）形成高亲和力信号受体，该受体将促炎细胞因子 IL-18 与造血细胞和非造血细胞中下游的 MyD88 依赖性通路偶联。IL-18 Rα 多肽是一种 I 型跨膜受体，具有信号肽、三个与 IL-18 接触的胞外 Ig 样结构域、一个跨膜区段和一个胞质 Toll/IL-1 受体 (TIR) 结构域，该结构域可成核形成信号复合物； IL-18 首先以低亲和力与 IL-18 Rα 结合，然后募集 IL-18Rβ 组装成异源三聚体受体-细胞因子复合物，从而在质膜上支持高亲和力结合和信号启动。成熟的 IL-18 与 IL-18 Rα 结合，使 TIR 结构域定位，从而募集衔接蛋白 MyD88，随后 IL-1R 相关激酶 (IRAK) 和 TRAF6 结合，激活 NF-κB 诱导激酶和 IκB 激酶复合物，导致 IκB 磷酸化和蛋白酶体降解以及 NF-κB 核转位。同时，平行的 TRAF 依赖性分支刺激 MAPK（包括 p38 和 MEK-ERK）以及 PI3K/Akt，从而使含有 IL-18Rα 的复合物驱动协调的转录程序，以产生 IFN-γ、诱导趋化因子（如 MCP-1）和更广泛的炎症基因表达。该信号模块在多种免疫环境中发挥作用：IL-18 Rα表达于辅助性T细胞亚群、NK细胞、B细胞、单核细胞和其他造血谱系细胞上，其激活可增强Th1极化，提高细胞毒性效应功能，并与IL-12及相关细胞因子协同作用，放大IFN-γ的输出；该受体在其他细胞类型（包括血管细胞和肠道细胞）上的表达，将IL-18的反应性扩展至屏障和基质细胞，并将上皮或内皮应激与先天性和适应性免疫激活联系起来。该受体链在多个层面受到调控：淋巴细胞上IL-18 Rα的诱导表达定义了IL-18反应性亚群；缺乏 TIR 结构域的诱饵或截短受体亚型以及可溶性拮抗剂（如 IL-18 结合蛋白）与 IL-18 Rα 竞争配体并减弱信号传导；而相关细胞因子（如 IL-37）可以与 IL-18 Rα 和抑制性共受体形成复合物，使平衡向抗炎输出转移，因此 IL-18 Rα 的丰度和环境对组织中 IL-18 信号的解读起着至关重要的作用。从病理生理学角度来看，IL-18 Rα 参与慢性炎症和自身免疫性疾病，其中 IL-18-IL-18R 信号传导增强会导致血管炎症、动脉粥样硬化病变发展和组织损伤；此外，IL-18 Rα 还参与淋巴恶性肿瘤和 B 细胞淋巴增殖性疾病，这些疾病会保留或上调 IL-18R 表达，并能对 IL-18 产生反应，表现为生长或细胞因子谱的改变，这表明含 IL-18 Rα 的复合物在宿主防御和疾病相关的免疫失调中都发挥着作用。

使用信息

抗体应用 IHC, IF, FCM 稀释比例
IHC IF FCM
1:40-1:125 1:40-1:125 1:400
反应性 Human
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW 62 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 
IF
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
 
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
 
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
 
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
 
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
 

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