IL-2 Antibody (Rabbit mAb) [G3L7] Datasheet

生物描述

特异性	IL-2 Antibody (Rabbit mAb) [G3L7] 可检测内源性 IL-2 总蛋白水平。
背景	白细胞介素-2 (IL-2) 是一种I型细胞因子，属于共同γ链家族，主要由活化的T细胞产生，是T细胞和NK细胞扩增、分化和存活的关键调节因子。该蛋白具有该细胞因子家族典型的四螺旋束折叠结构，并通过由IL-2Rα (CD25)、IL-2Rβ (CD122) 和共同γ链 (γc, CD132) 组成的受体系统传递信号。这些亚基根据其组成和在不同淋巴细胞亚群上的表达水平，组装成具有不同亲和力的受体。 IL-2Rα以低亲和力结合IL-2，并将该细胞因子呈递给IL-2Rβ和γc，形成中高亲和力的信号复合物。IL-2Rβ和γc构成信号核心，并与其他γc型细胞因子共享。其中，IL-2Rβ还与IL-15结合，γc参与IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21受体复合物的形成。IL-2与IL-2Rβ和γc的结合使相关的酪氨酸激酶JAK1和JAK3聚集，诱导其活化，并导致受体胞质尾部的磷酸化，进而募集并激活STAT5。STAT5二聚化后转位至细胞核，驱动IL-2反应基因的转录。 IL-2 还通过信号中间体与磷酸化受体基序的结合，与 PI3K-Akt 和 MAPK 通路连接，产生额外的输出，从而影响 IL-2 反应性淋巴细胞的代谢活性、细胞周期进程和存活。在 CD4⁺ T 细胞群中，IL-2-STAT5 信号通路支持效应 T 细胞的增殖和功能，同时维持调节性 T 细胞 (Treg) 的发育、维持和抑制能力。Treg 细胞表达高亲和力 IL-2 受体，并依赖于常规 T 细胞产生的 IL-2。IL-2 信号通路通过促进扩增的 T 细胞中死亡通路组分的表达，参与活化诱导的细胞死亡，从而参与抗原清除后 T 细胞反应的收缩。持续或改变的 IL-2 通路活性与免疫失调有关，包括当 IL-2 可用性或 IL-2R 向 Treg 细胞发出信号减少时发生的自身免疫，以及当效应 IL-2 反应受限时发生的病原体控制或抗肿瘤反应受损。

特异性

IL-2 Antibody (Rabbit mAb) [G3L7] 可检测内源性 IL-2 总蛋白水平。

背景

白细胞介素-2 (IL-2) 是一种I型细胞因子，属于共同γ链家族，主要由活化的T细胞产生，是T细胞和NK细胞扩增、分化和存活的关键调节因子。该蛋白具有该细胞因子家族典型的四螺旋束折叠结构，并通过由IL-2Rα (CD25)、IL-2Rβ (CD122) 和共同γ链 (γc, CD132) 组成的受体系统传递信号。这些亚基根据其组成和在不同淋巴细胞亚群上的表达水平，组装成具有不同亲和力的受体。 IL-2Rα以低亲和力结合IL-2，并将该细胞因子呈递给IL-2Rβ和γc，形成中高亲和力的信号复合物。IL-2Rβ和γc构成信号核心，并与其他γc型细胞因子共享。其中，IL-2Rβ还与IL-15结合，γc参与IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21受体复合物的形成。IL-2与IL-2Rβ和γc的结合使相关的酪氨酸激酶JAK1和JAK3聚集，诱导其活化，并导致受体胞质尾部的磷酸化，进而募集并激活STAT5。STAT5二聚化后转位至细胞核，驱动IL-2反应基因的转录。 IL-2 还通过信号中间体与磷酸化受体基序的结合，与 PI3K-Akt 和 MAPK 通路连接，产生额外的输出，从而影响 IL-2 反应性淋巴细胞的代谢活性、细胞周期进程和存活。在 CD4⁺ T 细胞群中，IL-2-STAT5 信号通路支持效应 T 细胞的增殖和功能，同时维持调节性 T 细胞 (Treg) 的发育、维持和抑制能力。Treg 细胞表达高亲和力 IL-2 受体，并依赖于常规 T 细胞产生的 IL-2。IL-2 信号通路通过促进扩增的 T 细胞中死亡通路组分的表达，参与活化诱导的细胞死亡，从而参与抗原清除后 T 细胞反应的收缩。持续或改变的 IL-2 通路活性与免疫失调有关，包括当 IL-2 可用性或 IL-2R 向 Treg 细胞发出信号减少时发生的自身免疫，以及当效应 IL-2 反应受限时发生的病原体控制或抗肿瘤反应受损。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1:1000	1:100

反应性

Human

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

18 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 60 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 60 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: Recombinant Human Interleukin-2