Influenza A Virus M2 Protein Antibody [L21L24]

目录号：F2238

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生物描述

特异性 Influenza A Virus M2 Protein Antibody [L21L24] 可检测内源性 Influenza A Virus M2 Protein 总蛋白水平。
背景 甲型流感病毒 (IAV) M2 蛋白是一种由 97 个氨基酸组成的整合膜病毒孔蛋白，对病毒生命周期至关重要，它是一种同源四聚体、pH 激活的质子选择性离子通道。其结构包括一个对病毒颗粒组装至关重要的 N 端胞外结构域（氨基酸残基 1-24）、一个构成通道核心的跨膜结构域（氨基酸残基 25-43）以及一个包含两亲性螺旋和参与病毒组装和出芽的无序尾部的 C 端结构域（氨基酸残基 44-97）。关键残基 His37 和 Trp41 分别作为质子传感器和通道门控。在病毒进入内体过程中，内体酸化后，M2 介导质子流入病毒颗粒，促进病毒核糖核蛋白的释放以进行复制。随后，M2蛋白维持反式高尔基网络中的最佳pH值，以防止血凝素过早激活；同时，其C端两亲性螺旋诱导膜曲率，这是病毒出芽和分裂所必需的。M2蛋白的活性受pH值和宿主蛋白相互作用的调控。尽管它是金刚烷胺等抗病毒药物的作用靶点，但由于跨膜结构域的突变，耐药性十分常见。

使用信息

抗体应用 IF 稀释比例
IF
1:2000
反应性 Influenza A
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IF
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
 
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
 
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
 
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
 
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
 

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