JIB-04

目录号：S7281 批次号：S728103

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化学数据

化学结构式 别名 NSC 693627 储存条件
(自收到货起)		 3年 / -20°C / 粉状
1年 / -80°C / 溶于溶剂
化学式

C17H13ClN4
分子量 308.76 CAS号 199596-05-9
Solubility (25°C)* 体外 DMSO 25 mg/mL (80.96 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

制备储备液

生物活性

产品描述 JIB-04 (NSC 693627)是一种广谱的选择性Jumonji histone demethylase抑制剂，无细胞试验中对JARID1A，JMJD2E，JMJD3，JMJD2A，JMJD2B，JMJD2C和JMJD2D的IC50分别是230 nM，340 nM，855 nM，445 nM，435 nM，1100 nM和290 nM。JIB‑04还可诱导细胞凋亡。
靶点
JARID1A [1]
(Cell-free assay)		 JMJD2D [1]
(Cell-free assay)		 JMJD2E [1]
(Cell-free assay)		 JMJD2B [1]
(Cell-free assay)		 JMJD2A [1]
(Cell-free assay)		 View More
230 nM 290 nM 340 nM 435 nM 445 nM
体外研究 JIB-04 以癌症选择性的方式引起转录改变，包括下调增殖基因，上调抗增殖/前凋亡基因。JIB-04能够以IC50低至10 nM的水平阻碍肺癌、前列腺癌细胞系的增殖，同时在HBECs和PrSCs/PrECs中产生较少的抗增殖活性。[1]
体内研究 在两个小鼠异种移植模型（H358或A549）中，JIB-04减少肿瘤生长，降低肿瘤中Jumonji组蛋白脱甲基酶的活性，延长肿瘤患者生存时间。[1]

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验 Jumonji脱甲基酶/脯氨酰羟化酶/LSD1活性检测
活性JMJD2E氨基酸1-350从E.coli中纯化，体外环境中与α-酮戊二酸，5-10 μM铁离子，抗坏血酸，组蛋白肽段基质一起使用，偶联反应时加入甲醛脱氢酶和NAD+来定量NADH的生成量，或使用Epigentek kit P-3081。组蛋白脱甲基反应结果通过Western分析来定量，构建His-tagged hJMJ2D氨基酸1-350表达体系，E.coli表达产物通过Qiagen Ni-NTA琼脂糖手册进行纯化。蛋白用50 mM TrisHCl pH 7.8+0.3 M NaCl + 10%甘油+200 mM immidazol洗脱，后用20 mM TrisHCl pH 7.4，0.15 M NaCl，0.2 mM PMSF，0.5 mM DTT，8%甘油透析。蛋白分装，速冻、储存在-80°C。Western blot中，~1.5 μg酶与0.3 μg H3K9me3基质（Active Motif #31213），10 μM (NH4)2Fe(SO4)2，1 mM α-酮戊二酸，2 mM L-抗坏血酸钠在50 mM pH 7.9溶液中混合，与溶媒或药物在37°C孵育30min-2hrs。加入SDS loading buffer后，煮沸，样品在NuPage 4-12% Bis-Tris胶上电泳，转膜，用Upstate #07-523处理硝化纤维素膜以检测H3K9me3。H3总信号是通过Active Motif #39763和连接IRDye 680的驴抗兔IgG（二抗, LI-COR # 926-32223），在Odyssey Infrared成像系统中获取图像。体外IC50检测和竞争性试验，100-200 ng纯化蛋白与溶媒、JIB-04或类似物共孵育，通过ELISA（H3K9me3去甲基作用：Epigentek kit P-3081，H3K4me3去甲基作用：P-3083，H3K27me3去甲基作用：P-3085）检测活性，反应液包含50mM Hepes pH 7.5，0.01% Tween 20，120nM (NH4)2Fe(SO4)2，1 mMα-酮戊二酸，2 mM L-抗坏血酸钠，50ng肽段基质。最终酶浓度分别为：206 nM JMJD2A，12 nM JMJD2B，60 nM JMJD2C，90 nM JMJD2D E.coli，30 nM JMJD2D Sf9，30 nM JMJD2E，30 nM Jarid1a，35 nM JMJD3。E.coli表达的hJMJD2A（氨基酸1-350）纯化后以每孔400 ng的量进行检测。通过GraphPad Prism软件计算IC50和进行曲线拟合。需要注意的是在基质竞争性试验中， 应该使分析处于线性范围并且不超出ELISA板的结合能力。细胞裂解物的H3K9me3脱甲基酶活性的直接测定：超声处理细胞（细胞接种浓度为2x10E+06/10cm板）或肿瘤PBS匀浆（3x4 sec），等量的蛋白与组蛋白H3K9me3基质在反应液中37°C孵育2h后，用Epigentek kit P-3081进行免疫检测。500 ng E.coli表达的PHD2纯化蛋白，溶于40mM Tris pH 7.4，100mM NaCl，20% glycerol，5mM β-mercapto-ethanol，10mM 麦芽糖备用。从HIF-1 ODD分离出的生物素化的肽段固定在亲和素包裹的96孔板中。酶与被试药物在反应液（20 mM Tris-Cl pH 7.5，5 mM KCl，1.5 mM MgCl2，2 mM DTT，0.12 μM硫酸亚铁，0.5 mM戊邻酮二酸盐，1 mM抗坏血酸）中室温孵育45min。α-酮戊二酸的竞争性类似物DMOG作为抑制作用的阳性对照。肽段羟基化是通过对羟基化HIF肽表位使用多克隆兔抗体，再加入连接羊抗兔HPR的二抗。EnVision上读取发光值。LSD1重组蛋白活性通过使用Epigentek kit P-3075检测。
细胞实验 细胞系 人肺癌细胞系(LCa)，原代或非致癌细胞系HBECs，前列腺癌(PCa)，原代前列腺基质细胞(PrSC)和前列腺上皮细胞(PrEC)。
浓度 ~10 μM
处理时间 96小时
方法

以每孔1500-3000细胞接种至96孔板，次日开始以递增浓度的化合物处理细胞4天后，用MTS标准分析法用Promega’s Cell Titer或Cell Titer-Glo试剂测试细胞活性，使用Spectra Max或FlouroStar Omega酶标仪读取490 nm和650 nm的吸光度。每种细胞系进行2-5次独立测试，每次包含4-8个测试孔。IC50 通过DIVISA软件计算得到。
动物实验 动物模型 H358或A549小鼠异种移植模型
剂量 110 mg/kg (H358，腹腔注射)，55 mg/kg (A549, 灌胃)
给药处理 灌胃或腹腔注射

客户使用selleck产品的实验数据

数据来源于[Data independently produced by , , The journal of biological chemistry, 2016, 291(21):11083-11093.]

数据来源于[Data independently produced by , , Int J Biol Sci, 2018, 14(9):1122-1132]

JIB-04在文献中得到引用

Methionine restriction promotes cGAS activation and chromatin untethering through demethylation to enhance antitumor immunity [ Cancer Cell, 2023, 41(6):1118-1133.e12] PubMed: 37267951
JIB-04 Has Broad-Spectrum Antiviral Activity and Inhibits SARS-CoV-2 Replication and Coronavirus Pathogenesis [ mBio, 2022, 13(1):e0337721] PubMed: 35038906
Confined migration induces heterochromatin formation and alters chromatin accessibility [ iScience, 2022, 25(9):104978] PubMed: 36117991
Sensitization of Resistant Breast Cancer Cells with a Jumonji Family Histone Demethylase Inhibitor [ Cancers (Basel), 2022, 14(11)2631] PubMed: 35681611
Inhibitors of Jumonji C domain-containing histone lysine demethylases overcome cisplatin and paclitaxel resistance in non-small cell lung cancer through APC/Cdh1-dependent degradation of CtIP and PAF15 [ Cancer Biol Ther, 2022, 23(1):65-75] PubMed: 35100078
A siRNA screening of UBE2 family demonstrated that UBE2R1 had a high repressive effect on HIV Tat protein [ Biochem Biophys Rep, 2022, 32:101366] PubMed: 36275929
Upregulation of deubiquitinase USP7 by transcription factor FOXO6 promotes EC progression via targeting the JMJD3/CLU axis [ Mol Ther Oncolytics, 2021, 20:583-595] PubMed: 33768140
IOX1 activity as sepsis therapy and an antibiotic against multidrug-resistant bacteria [ Sci Rep, 2021, 11(1):2942] PubMed: 33536477
Hypoxia stimulates SUMOylation-dependent stabilization of KDM5B [ Research Square, 2021, 10.21203/rs.3.rs-620216/v1] PubMed: None
Reduced Mitochondrial Apoptotic Priming Drives Resistance to BH3 Mimetics in Acute Myeloid Leukemia [ Cancer Cell, 2020, 38(6):872-890.e6] PubMed: 33217342

特定的存储和包装每个产品的信息在产品说明书上都有注明。大多数Selleck产品，在推荐的条件下存储可稳定保存两年。产品有时建议的储存温度不同，大多数建议储存在-20°C，抑制剂属于化学试剂，可在常温下运输储存两周左右。即使如此，我们保证产品的出货量将保持产品质量的条件下，一般都会放入冰袋。望阁下收到产品后，请按照产品数据表建议适当存储。

如果需要长期保存，请于零下二十度低温保存。禁止用于人体及治疗！

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