Laminin α5/LAMA5 Antibody [P21J13]

目录号：F3673

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生物描述

特异性 Laminin α5/LAMA5 Antibody [P21J13] 可检测内源性 Laminin α5/LAMA5 总蛋白水平。
背景 层粘连蛋白α5 (LAMA5) 是构成上皮和内皮基底膜的层粘连蛋白-511/521/523异源三聚体中最大的α链，其特征在于N端LN结构域通过β链和γ链的相互作用介导末端聚合，以及C端区域，该区域在长十字形臂中包含五个球状LG1-5亚结构域。LG4-5串联结构通过RGD样基序和特定的碳水化合物部分暴露整合素α3β1/α6β1和α-肌营养不良蛋白聚糖的结合位点，以及与syndecan和Lu-BCAM的结合界面，而中央卷曲螺旋(LCC)区域则稳定α5β1γ1组装体。在生理pH和Ca²⁺条件下，LAMA5通过LN结构域介导的拉链状三聚体间相互作用自组装成网络，形成一个协调上皮-间质相互作用的支架：LG1-3串联结构域锚定整合素信号，激活FAK/Src/PI3K/Akt通路，促进细胞增殖和迁移；LG4-5结构域通过肌营养不良蛋白聚糖-肌营养不良蛋白连接抑制细胞凋亡。短臂G结构域调节IV型胶原和硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的整合，有助于滤过屏障的形成；而柔韧的长臂则吸收拉伸应力（约10-50 MPa）。在器官发生过程中，LAMA5通过限制上皮分支来调控肾小球和胎盘迷路的模式形成，并与VEGF-A协同调节，促进内皮细胞出芽。小鼠基因敲除（Lama5 基因缺失）导致胚胎在 E10.5 时死亡，这是由于绒毛尿囊融合缺陷和神经管闭合缺陷，与极性信号传导受损有关；而成年肾小球敲除则导致蛋白尿和纤维化。

使用信息

抗体应用 IF 稀释比例
反应性 Human
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IF
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
 
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
 
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
 
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
 
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
 

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