Langerin/CD207 Antibody (Rat mAb) [F3M20]

目录号：F4533

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生物描述

特异性 Langerin/CD207 Antibody (Rat mAb) [F3M20] 可检测内源性 Langerin/CD207 总蛋白水平。
背景 朗格林（CD207）是一种II型跨膜C型凝集素受体，选择性地表达于朗格汉斯细胞和特定亚群的树突状细胞中。它作为一种糖结合内吞受体，将上皮屏障处的病原体识别与抗原加工和T细胞活化联系起来。该蛋白包含一个短的胞质尾、一个跨膜区段、一个介导同源三聚体形成的卷曲螺旋颈部，以及一个腔内C型凝集素碳水化合物识别结构域。该结构域可结合病毒、真菌和细菌表面的甘露糖、岩藻糖、N-乙酰氨基葡萄糖和β-葡聚糖。三聚化可提高其对多价糖配体的亲和力和特异性。朗格林定位于质膜和伯贝克颗粒。伯贝克颗粒是由重叠和拉链状膜形成的棒状或球拍状细胞器，其生物发生依赖于朗格林的表达，其超微结构反映了朗格林驱动的膜重排。突变分析表明，朗格林的特定区域是伯贝克颗粒形成所必需的，这表明该受体是这些朗格汉斯细胞特异性细胞器的关键组织者。配体结合诱导朗格林-货物复合物从细胞表面快速内化进入伯贝克颗粒及其相关的内体结构，该过程不依赖于网格蛋白。在内体结构中，捕获的抗原被加工并加载到MHC II类分子上，并通过交叉呈递加载到MHC I类分子上。在体内，将抗原靶向树突状细胞上的朗格林可有效激活和增殖CD4⁺和CD8⁺ T细胞，并实现持久的肽-MHC分子呈递。这种内化和转运途径使朗格汉斯蛋白能够在黏膜和皮肤表面发挥抗病毒和抗真菌屏障的作用；HIV-1、麻疹病毒以及分枝杆菌和真菌的糖缀合物与朗格汉斯蛋白结合，并被引导至伯贝克颗粒中。在伯贝克颗粒中，病毒颗粒和微生物成分被降解并加工用于抗原呈递，而不是有效感染朗格汉斯细胞，从而在朗格汉斯蛋白表达和功能完整的情况下限制病原体的传播。朗格汉斯蛋白受细胞因子和组织环境的调控，TGF-β1和局部上皮因子在朗格汉斯细胞分化过程中促进其表达，而随着朗格汉斯细胞终末成熟并迁移至淋巴结，其表达通常会下调。因此，CD207是皮肤和黏膜上皮以及淋巴和肺组织中特化树突状细胞亚群中朗格汉斯细胞身份和分化状态的可靠标志物。 CD207 的基因变异会降低朗格林的功能或改变聚糖结合，从而损害甘露糖的识别，并与皮肤感染易感性增加和 LC 介导的屏障免疫改变有关。朗格林的表达可用于诊断，以区分朗格汉斯细胞组织细胞增生症和非朗格汉斯细胞组织细胞增生症，并绘制口腔、皮肤和肺部疾病中富含朗格汉斯细胞的炎症病变。

使用信息

抗体应用 IHC, IF, FCM, ELISA 稀释比例
IHC IF FCM
1:10-1:500 1:10-1:500 1:10-1:1000
反应性 Human, Mouse, Rat, Porcine, Equine
抗体类型 Rat Monoclonal Antibody MW 37 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 
IF
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
 
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
 
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
 
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
 
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
 

Application Data

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human skin tissue with F4533 at 1:10 dilution.