Neutrophil Elastase Rabbit mAb

目录号：F2430

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生物描述

特异性 Neutrophil Elastase Rabbit mAb 用于检测内源性 Neutrophil elastase 总的蛋白水平。
背景 中性粒细胞弹性蛋白酶（Neutrophil elastase，ELANE） 是由 ELANE 基因编码的丝氨酸蛋白酶，储存于中性粒细胞的嗜天青颗粒（azurophilic granules）中，在先天免疫中起关键作用，可降解细胞外基质蛋白和细菌毒力因子。在结构上，它是一种胰蛋白酶类型的丝氨酸蛋白酶，具有由组氨酸、天冬氨酸和丝氨酸组成的催化三联体，最初合成为无活性的前酶，并通过翻译后修饰激活。该酶主要在中性粒细胞中表达，并在炎症过程中释放，定位于中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）以促进病原体清除。然而，过量的中性粒细胞弹性蛋白酶活性可导致慢性炎症性肺病（如囊性纤维化和慢性阻塞性肺病），通过促进组织损伤、粘液分泌过多和免疫失调加重疾病。因此，靶向中性粒细胞弹性蛋白酶的治疗策略在减轻炎症和肺损伤方面具有重要应用前景。

使用信息

抗体应用 WB, IHC, IF, FCM 稀释比例
WB IHC IF FCM
1:1000 1:400 1:70 1:20
反应性 Human
抗体类型 Rabbit MW 29 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
22. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 
IF

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