Nurr1 Antibody [L9M11]

目录号：F2094

打印

生物描述

特异性 Nurr1 Antibody [L9M11] 可检测内源性 Nurr1 总蛋白水平。
背景 Nurr1 (NR4A2) 是一种孤儿核受体转录因子，对中脑多巴胺能神经元的特化、存活和维持至关重要。它具有模块化结构，包括：N 端 A/B 转录激活结构域 (AF-1)，具有磷酸化位点（ERK 磷酸化 Ser336）；中央 DNA 结合结构域 (DBD)，具有两个锌指基序，可识别单体中的 NGFI-B 反应元件 (NBRE: AAAGGTCA) 或 RXR 异二聚体中的 IR0 半位点；柔性铰链区，有助于辅因子募集；以及 C 端配体结合结构域 (LBD)，缺乏传统的疏水口袋，但在 H11/H12 上暴露带电螺旋槽，可通过疏水斑块与辅调节因子对接。 Nurr1通过AF-1/2的协同作用持续激活，通过染色质环化和CBP/p300共激活，以及RXRα异二聚化增强复合NBRE-DR5元件的转录，从而驱动多巴胺能基因程序（酪氨酸羟化酶、VMAT2、DAT、Pitx3）。同时，翻译后修饰，如ERK磷酸化增强AF-1活性、K185位点的SUMO化通过CtBP抑制活性、GSK3β磷酸化破坏RXR相互作用，在发育和应激反应过程中精细调控其活性，并与Wnt/β-catenin信号通路偶联以促进祖细胞增殖，与BDNF/TrkB信号通路偶联以发挥神经保护作用。杂合突变（R502X）导致遗传性帕金森病，并伴有TH+神经元减少；而年龄相关性衰退会加剧散发性帕金森病中的多巴胺能神经元丢失。

使用信息

抗体应用 IHC 稀释比例
IHC
1:200
反应性 Rat
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

Application Data