Orexin A Antibody (Rabbit mAb) [P6H3]

目录号：F8328

打印

生物描述

特异性 Orexin A Antibody (Rabbit mAb) [P6H3] 可检测内源性 Orexin A 总蛋白水平。
背景 食欲素A与食欲素B是两种神经肽，它们均由单一的前体食欲素经蛋白水解切割而来，该前体仅由位于下丘脑外侧和后部的神经元合成。这两种肽均能结合并激活两种密切相关的G蛋白偶联受体OX1R和OX2R。食欲素A对两种受体亚型的亲和力相当，而食欲素B则对OX2R具有选择性，这使得该双肽双受体系统具有内在的信号多样性。食欲素神经元广泛投射至整个中枢神经系统，包括调控睡眠-觉醒周期的主要核团。中枢注射食欲素A可直接刺激食物摄入，从而将下丘脑食欲素信号与急性摄食行为联系起来。禁食期间前体食欲素mRNA表达升高，表明食欲素系统是一种反馈调节器，它将营养状态与摄食驱动联系起来，而非作为一种组成型激活的信号。食欲素神经元直接受循环葡萄糖、瘦素和胃饥饿素的调控，这种反应性使食欲素系统能够根据全身能量平衡调节觉醒输出，从而在能量不足状态（例如禁食）下提高觉醒度。OX2R信号通路是睡眠-觉醒状态稳定的主要驱动力，其在结节乳头体核和基底前脑区域的受体活性维持觉醒状态；而OX1R信号通路则通过投射至中脑边缘回路，进一步促进奖赏相关行为和动机行为。食欲素神经元的基因缺失或 OX2R 信号传导的破坏会产生一种与人类嗜睡症非常相似的表型，即清醒维持不良和猝倒，这种功能丧失的关系直接指导了 OX2R 选择性激动剂的开发，作为一种针对 1 型嗜睡症潜在神经化学缺陷的治疗策略，这与通过阻断相同的促醒通路而开发的用于治疗失眠的食欲素受体拮抗剂不同。

使用信息

抗体应用 IHC, ELISA 稀释比例
IHC
1:1000
反应性 Mouse, Rat
抗体类型 Rabbit Monoclonal Antibody MW 13 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

Application Data

IHC

Validated by Selleck

  • Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded mouse hypothalamus tissue with F8328 at 1:1000 dilution.