p38β MAPK Antibody [F9P5] Datasheet

生物描述

特异性	p38β MAPK Antibody [F9P5] 可检测内源性 p38β MAPK 总蛋白水平。
背景	p38β MAPK是p38丝裂原活化蛋白激酶家族的四种亚型之一，其他四种亚型包括p38α、p38β、p38γ和p38δ，它们介导细胞对环境应激和炎症细胞因子的反应。p38β具有一个保守的激酶结构域，该结构域由位于ATP结合位点两侧的N端和C端结构域组成，并且在激活环的Thr180和Tyr182残基处存在TGY基序。p38β的完全激活需要上游激酶MKK3和MKK6对这些残基进行双重磷酸化，而这种磷酸化是在渗透压冲击、LPS或生长因子等刺激下发生的。一旦被激活，p38β整合这些信号，从而调节各种组织中的基因表达、细胞凋亡和细胞骨架重塑。 p38β 可磷酸化转录因子，包括 ATF-2 和 MEF2，从而驱动炎症介质和应激反应基因的表达。在中枢神经系统中，p38β 通过 MAPKAP 激酶影响神经元翻译，而 MAPKAP 激酶通过富含 AU 的元件调节 mRNA 的稳定性。此外，p38β 的激活会导致钠/钙交换器 NCX1 的磷酸化，从而影响离子稳态和神经元兴奋性。与 p38α 不同，p38β 具有组织特异性表达和独特的底物偏好性，支持刺激特异性的细胞反应。p38β 通过改变蛋白质合成和促进对淀粉样蛋白 β 或氧化应激的炎症反应，参与神经退行性疾病的发生。p38β 活性的增加与癌症进展相关，促进细胞迁移和存活信号传导增强，以及炎症状态下内皮屏障功能障碍和活性氧 (ROS) 的产生。 p38β 还通过调节 MAPKAPK2 和 MEF2 依赖的基因转录来协调肌生成和适应。

特异性

p38β MAPK Antibody [F9P5] 可检测内源性 p38β MAPK 总蛋白水平。

背景

p38β MAPK是p38丝裂原活化蛋白激酶家族的四种亚型之一，其他四种亚型包括p38α、p38β、p38γ和p38δ，它们介导细胞对环境应激和炎症细胞因子的反应。p38β具有一个保守的激酶结构域，该结构域由位于ATP结合位点两侧的N端和C端结构域组成，并且在激活环的Thr180和Tyr182残基处存在TGY基序。p38β的完全激活需要上游激酶MKK3和MKK6对这些残基进行双重磷酸化，而这种磷酸化是在渗透压冲击、LPS或生长因子等刺激下发生的。一旦被激活，p38β整合这些信号，从而调节各种组织中的基因表达、细胞凋亡和细胞骨架重塑。 p38β 可磷酸化转录因子，包括 ATF-2 和 MEF2，从而驱动炎症介质和应激反应基因的表达。在中枢神经系统中，p38β 通过 MAPKAP 激酶影响神经元翻译，而 MAPKAP 激酶通过富含 AU 的元件调节 mRNA 的稳定性。此外，p38β 的激活会导致钠/钙交换器 NCX1 的磷酸化，从而影响离子稳态和神经元兴奋性。与 p38α 不同，p38β 具有组织特异性表达和独特的底物偏好性，支持刺激特异性的细胞反应。p38β 通过改变蛋白质合成和促进对淀粉样蛋白 β 或氧化应激的炎症反应，参与神经退行性疾病的发生。p38β 活性的增加与癌症进展相关，促进细胞迁移和存活信号传导增强，以及炎症状态下内皮屏障功能障碍和活性氧 (ROS) 的产生。 p38β 还通过调节 MAPKAPK2 和 MEF2 依赖的基因转录来协调肌生成和适应。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1:1000	1:50

反应性

Human, Monkey

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

43 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: HUVEC, Lane 2: COS