PF-477736

目录号：S2904 批次号：S290403

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化学数据

化学结构式 别名 PF-736, PF-00477736 储存条件
(自收到货起)		 3年 / -20°C / 粉状
1年 / -80°C / 溶于溶剂
化学式

C22H25N7O2
分子量 419.48 CAS号 952021-60-2
Solubility (25°C)* 体外 DMSO 84 mg/mL (200.24 mM)
Water ˂1 mg/mL
Ethanol ˂1 mg/mL
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

制备储备液

生物活性

产品描述 PF-477736 (PF-736, PF-00477736)是一种有效的，选择性的，ATP竞争性Chk1抑制剂，无细胞试验中Ki为0.49 nM，也抑制VEGFR2， Aurora-A， FGFR3， Flt3， Fms (CSF1R)， Ret和Yes。作用于Chk1比作用于Chk2选择性高100倍左右。
靶点
Chk1 [1]
(Cell-free assay)		 VEGFR2 [1]
(Cell-free assay)		 Fms [1]
(Cell-free assay)		 YES [1]
(Cell-free assay)		 Chk2 [1]
(Cell-free assay)
0.49 nM(Ki) 8 nM(Ki) 10 nM(Ki) 14 nM(Ki) 47 nM(Ki)
体外研究

PF 477736(128 nM)作用于CA46 和 HeLa细胞，废除Camptothecin诱导的DNA损伤检查点，这种作用具有剂量依赖性。PF 477736作用于HT29细胞，有效废除诱导的S期停滞，使凋亡细胞群相应增加。PF 477736(540 nM)作用于HT29细胞，增强诱导的细胞毒性,这种作用具有时间和剂量依赖性。在MTT法检测中，PF 477736增强一组化疗剂作用于广谱p53缺失的人类癌细胞系的抑制生长活性。PF 477736(360 nM)作用于停滞的细胞，诱导H2AX磷酸化强度剧增，DNA损伤位点附近产生大量的γ-H2AX分子。[1] PF 477736(0.5 nM)作用于HL-60细胞，在Curcumin存在时，选择性抑制p73和p53磷酸化。[2] PF 477736(360 nM)作用于COLO205细胞，抑制诱导的组蛋白 H3 (Ser10) 和 Cdc25C (Ser216)磷酸化，且增强凋亡。[3] PF 477736(250 nM)与MK-1775联用作用于OVCAR-5细胞，具有显著的协同细胞毒性。PF 477736(250 nM)与MK-1775 联用作用于OVCAR-5细胞，导致DNA含量介于2N和4N之间的细胞累积。PF 477736(250 nM)与MK-1775联用作用于OVCAR-5细胞，DNA复制结束前产生过早的有丝分裂，受损的DNA导致细胞凋亡。[4]
体内研究

PF 477736按4 mg/kg剂量处理大鼠，终末半衰期(T1/2)为2.9小时, AUC为5.72 μg×hr/mL，CLp为11.8 mL/min/kg。PF 477736按最大耐受剂量处理携带Colo205移植瘤的小鼠模型，增强抗肿瘤活性，这种作用具有剂量依赖性。PF 477736(12 mg/kg)处理携带Colo205移植瘤的小鼠模型，诱导组蛋白 H3 (Ser10)磷酸化和磷酸化组蛋白 H2AX增加。[1] PF 477736(15 mg/kg)腹腔注射处理COLO205和MDA-MB-231，移植瘤模型，增强诱导的肿瘤生长抑制和肿瘤生长延迟。[3] PF 477736 (10 mg/kg ，腹腔注射，每天一次) 与MK-1775 (30 mg/kg，口服处理，每天两次) 联用作用于携带OVCAR-5移植瘤的小鼠，增强抑制肿瘤生长的效果。 [4]

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验 结合实验
在96孔板中30°C下进行实验20分钟，孔中为0.1 mL实验缓冲液，包含50 mM TRIS pH 7.5, 0.4 M NaCl, 4 mM PEP, 0.15 mM NADH, 28 单位乳酸脱氢酶/mL, 16 单位丙酮酸激酶/mL, 3 mM DTT, 0.125 mM Syntide-2, 0.15 mM ATP和25 mM MgCl2。加入1 nM CHK1激酶域开始实验。PF 477736存在时，通过测量初始速率，而测定对CHK1的抑制活性。通过酶动力学和Excel软件分析数据，拟合竞争性抑制的动力学模型，获得Ki值。测评PF 477736的激酶选择性。
细胞实验 细胞系 HT29, Colo205, PC-3, MDA-MB-231 和 K562 细胞
浓度 ~1 μM
处理时间 96 小时
方法

IC50 实验，测量PF 477736作用于p53缺陷的人类癌细胞系的抗增殖效果。每种细胞系接种在96孔实验板中，孔中含完全培养基，细胞呈指数生长，进行贴壁生长16小时。每个实验板添加连续稀释的PF 477736和合适的对照组。细胞与药物温育96小时。温育后，每孔加入在完全培养基稀释的MTT工作储存液，细胞温育4小时。离心后，去除上清液，每孔加入DMSO加入，在SpectraMax酶标仪上在540nm处进行读数。
动物实验 动物模型 携带Colo205移植瘤的小鼠模型
剂量 40 mg/kg
给药处理 静脉注射

客户使用selleck产品的实验数据

数据来源于[Data independently produced by , , BMC Cancer, 2015, 10.1186/s12885-015-1231-z]

PF-477736在文献中得到引用

Centrioles are frequently amplified in early B cell development but dispensable for humoral immunity [ Nat Commun, 2024, 15(1):8890] PubMed: 39406735
An RNA damage response network mediates the lethality of 5-FU in colorectal cancer [ Cell Rep Med, 2024, 5(10):101778] PubMed: 39378883
ATR, CHK1 and WEE1 inhibitors cause homologous recombination repair deficiency to induce synthetic lethality with PARP inhibitors [ Br J Cancer, 2024, 10.1038/s41416-024-02745-0] PubMed: 38965423
A multiparametric screen uncovers FDA-approved small molecules that potentiate the nuclear mechano-dysfunctions in ATR-defective cells [ Sci Rep, 2024, 14(1):30786] PubMed: 39730498
Mild replication stress causes premature centriole disengagement via a sub-critical Plk1 activity under the control of ATR-Chk1 [ Nat Commun, 2023, 14(1):6088] PubMed: 37773176
Mild replication stress causes premature centriole disengagement via a sub-critical Plk1 activity under the control of ATR-Chk1 [ Nat Commun, 2023, 14(1):6088] PubMed: 37773176
BRD7 suppresses tumor chemosensitivity to CHK1 inhibitors by inhibiting USP1-mediated deubiquitination of CHK1 [ Cell Death Discov, 2023, 9(1):313] PubMed: 37626049
The p38/MK2 Pathway Functions as Chk1-Backup Downstream of ATM/ATR in G2-Checkpoint Activation in Cells Exposed to Ionizing Radiation [ Cells, 2023, 12(10)1387] PubMed: 37408221
Deregulation and epigenetic modification of BCL2-family genes cause resistance to venetoclax in hematologic malignancies [ Blood, 2022, blood.2021014304] PubMed: 35704690
Resistance to ATR Inhibitors Is Mediated by Loss of the Nonsense-Mediated Decay Factor UPF2 [ Cancer Res, 2022, 82(21):3950-3961] PubMed: 36273492

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