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别名 | N/A | 储存条件 (自收到货起) |
3年 / -20°C / 粉状 1年 / -80°C / 溶于溶剂 |
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化学式 | C20H25ClN4O3S |
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分子量 | 436.96 | CAS号 | 1373615-35-0 | |
Solubility (25°C)* | 体外 | DMSO | 87 mg/mL (199.1 mM) | |
Water | Insoluble | |||
Ethanol | Insoluble | |||
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble. * Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations. |
产品描述 | PF-5274857是一种有效的,选择性Smoothened(Smo)拮抗剂,抑制Hedgehog (Hh)信号通路,IC50和Ki分别为5.8 nM和4.6 nM,可以穿透血脑屏障。 | ||||
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靶点 |
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体外研究 | PF-5274857的Ki为4.6 nM. PF-5274857可以完全抑制 Shh诱导的Hh通路活性,通过在MEF细胞中测量Smo下游基因 Gli1 的转录活性可知IC50为2.7nM。PF-5274857可以结合 Smo,IC50 为 5.8 nM. PF-5274857对μ-阿片受体可以微弱抑制,在随后的一项功能分析中测得解离常数为36μM [1] | ||||
体内研究 | PF-5274857具有明显的肿瘤生长抑制作用,这用抑制具有剂量依赖特性并能在高剂量(≥10 mg/kg)治疗6天后诱导肿瘤退化。在肿瘤组织中PF-5274857不同程度地下调Gli1, Gli2, Ptch1和 Ptch2基因的表达水平,用药后6到12小时达到最好效果,然而PF-5274857 对Smo表达水平没有影响。在皮肤组织中,PF-5274857在相似的时间进程中下调Gli1和Gli2表达。在Ptch+/−p53+/−髓母细胞瘤同种异体移植小鼠模型中得到的PF-5274857对肿瘤Gli1 mRNA生产率抑制的IC50为 8.9 nM ,相当于血浆中药物在这一浓度下处理6天后肿瘤生长抑制达到119%。在Ptch+/−p53−/− 髓母细胞瘤同种异体移植小鼠模型中IC50值预计为 3.5 nM, 与Ptch+/−p53+/−模型结果一致[1] 。 | ||||
特征 | PF-5274857对于治疗某些肿瘤具有非常好的潜在临床应用价值,如 脑瘤以及活化的Hh通路驱动的脑转移瘤。 |
激酶实验 | 生化分析 | |
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过表达人源Smo (氨基酸181-787)的HEK293细胞培养在含有10% FBS, Pen–Strep以及 0.1 mg/mL 潮霉素的DMEM培养基中,直到90%密度。用冷的PBS洗过之后, 将细胞用膜制备缓冲液重悬均匀,缓冲液成分包含50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 250 mM 蔗糖含有Roche完全蛋白酶鸡尾酒。将上述匀浆离心并用分析缓冲液重悬细胞,分析缓冲液包含50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 100 mM NaCl, 25 mM MgCl2, 1 mM EDTA, 和0.1%无蛋白酶BSA,然后在玻璃组织研磨机中使之均匀。含有Smo的总蛋白利用Pierce BCA蛋白分析法来测定。对于竞争性结合实验分析,加入100 μL 分析缓冲液到96孔GF/B 滤板,进行10分钟的滤板预湿润然后去掉。然后加入20 μL 分析缓冲液, 10μL药物的连续稀释液, 20 μL 3H-Smo 拮抗剂 (终浓度3 nM)和50 μL 膜制备品(含有40 μg 总蛋白)。滤板在室温孵育2小时,洗过之后真空晾干。然后滤板在60°C 烘箱中干燥1小时,加入 45 μL Microscint 20,室温孵育30 分钟到1小时, 然后用TopCount闪烁记数器计数。数据用GraphPad Prism软件进行分析。 | ||
细胞实验 | 细胞系 | Gli-Luc/MEF 细胞 |
浓度 | 50 pM- 3 μM | |
处理时间 | 48 小时 | |
方法 | Gli-Luc/MEF细胞培养在含有10%热失活FBS, 2mM l-glutamine和0.55 mM β-mercaptoethanol 的DMEM培养基中直到90%细胞密度。第一天, 胰酶消化后的细胞按每孔7,500个接种在白色384孔板中,每孔加入20 μL含有1% 热失活FBS和1 mM 丙酮酸钠的OptiMEM 培养基。平板在37°C和5% CO2环境中培养过夜。第2天, 加入3 μM到50pM的PF-5274857 ,按照3倍连续稀释,然后加入重组鼠源Sonic Hedgehog,终浓度2μg/mL。在37°C,5% CO2条件下细胞与PF-5274857和Shh孵育48小时。第四天利用Bright-Glo 荧光素酶分析系统进行荧光素酶分析。简言之, 每孔培养基中加入25 μL Bright-Glo荧光素酶试剂。室温孵育5分钟然后酶标仪检测数据然后计算PF-5274857的IC50值。 | |
动物实验 | 动物模型 | 携带原发性Ptch+/−p53+/−或Ptch+/−p53−/−髓母细胞瘤肿瘤的 SCID-beige 小鼠 |
剂量 | 0 mg/kg, 1 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg和30 mg/kg | |
给药处理 | 口服 |
Establishment and characterization of immortalized sweat gland myoepithelial cells [ Sci Rep, 2022, 12(1):7] | PubMed: 34997030 |
A high level of KLF12 causes folic acid-resistant neural tube defects by activating the Shh signalling pathway in mice [ Biol Reprod, 2021, ioab111] | PubMed: 34104947 |
A novel human colon signet-ring cell carcinoma organoid line: establishment, characterization and application [ Carcinogenesis, 2020, 41(7):993-1004] | PubMed: 31740922 |
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