Phospho-Tau (Ser262) Antibody [N15P23]

目录号：F3922

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生物描述

特异性 Phospho-Tau (Ser262) Antibody [N15P23] 仅识别 Ser262 处磷酸化的内源性 Tau 蛋白水平。
背景 磷酸化 Tau (Ser262) 是指微管相关蛋白 tau 在其富含脯氨酸的微管结合重复结构域 (R1/R2 连接处) 的丝氨酸 262 位点发生磷酸化，该蛋白以天然无结构的异构体 (0N、1N、2N 变体) 的形式存在，包含四个不完全的微管结合重复序列 (MTBR)，具有 275-VQIVYK283 KXGS 基序；Ser262 位点的磷酸化，通常伴随 pSer356 位点的磷酸化，破坏了由 MARK2/Par-1 激酶引发的 KXGS 表位，并通过空间位阻干扰微管晶格，显著降低 tau 对 β-微管蛋白的亲和力（Kd 值变化 >10 倍）。由β-淀粉样蛋白寡聚体通过钙蛋白酶切割或CDK5/p25过度激活激活MARK2而引发的磷酸化事件，通过构象解离触发微管的快速解聚。pSer262将R1/R2重复序列间的环锁定在无序状态，从而暴露远端磷酸化位点（Ser202/Thr205、Ser396/Ser404），使其可被GSK3β/Fyn激活。这种连续的磷酸化促进tau蛋白寡聚化为有毒的4R-原纤维种子，这些种子能够通过神经元摄取和胞吐作用进行跨突触传播，同时导致tau蛋白从轴突错误定位到胞体树突区室。生理上，PP2A 介导的去磷酸化作用导致 pSer262 的瞬时循环，从而调节神经元可塑性过程中的微管动力学；而阿尔茨海默病（Braak I-II）中升高的慢性过度磷酸化，则比神经原纤维缠结（NFT）的形成早数年，这使得 pSer262 成为脑脊液中可检测到的“早期守门人”生物标志物（pTau262/tau 比率），它介导 Aβ42 突触毒性、突触丢失和认知能力下降，并且对颗粒状前缠结具有特异性，而非成熟的成对螺旋丝（PHF）。

使用信息

抗体应用 IHC, ELISA 稀释比例
IHC
1:100-1:200
反应性 Human
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW 33-79 kDa
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

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