Poly/Mono-ADP Ribose Antibody [A22J18]

目录号：F0957

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生物描述

特异性

Poly/Mono-ADP Ribose Antibody [A22J18] 可识别内源性 ADP 核糖基化蛋白，不与其他翻译后修饰交叉反应。
背景 Poly(ADP-ribose) (PAR) and mono(ADP-ribose) (MAR) 是由ADP核糖基转移酶介导的可逆的翻译后修饰，特别是聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)家族成员。MAR指的是从NAD⁺转移的单个ADP-核糖单位的共价添加—到目标蛋白上的特定氨基酸残基（通常是天冬氨酸、谷氨酸或赖氨酸）。相比之下，PAR由两个或更多的ADP-核糖单位组成，通过核糖-核糖糖苷键连接，形成线性或分枝链。结构上，每个ADP-核糖单位贡献约0.5 kDa，使PAR成为一个大型的、高度负电荷且灵活的聚合物，能够支撑各种蛋白复合体。PARP1是核内最丰富和催化活性最高的PARP，它通过DNA链断裂和应激信号快速激活，催化聚ADP核糖化以招募和组织DNA修复复合体。MARylation和PARylation在细胞中扮演不同的角色—MAR通常调节单个蛋白的活性或相互作用，而PAR在DNA修复、染色质重塑、应激颗粒形成、有丝分裂纺锤体组装和核仁完整性等过程中作为动态结构元素发挥更广泛的功能。PARPs的合成与PARG和宏结构域水解酶等酶的降解之间的平衡对于维持细胞稳态至关重要。

使用信息

抗体应用 WB, IF 稀释比例
WB IF
1:1000 1:12000 - 1:48000
反应性 All
抗体类型 Rabbit Monoclonal Antibody MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IF
实验步骤：
 
标本制备
1. 吸出液体，然后用 1X PBS 稀释的 4% 多聚甲醛覆盖细胞至 2-3 mm 的深度。
注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。
2. 室温固定细胞 15 分钟。
3. 吸出固定液，用 1X PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。
4. 继续进行免疫染色。
 
免疫染色
1. 添加封闭缓冲液并在室温下孵育 60 分钟。
2. 按照建议在抗体稀释缓冲液中制备一抗稀释液。
3. 吸出封闭液，加入制备好的一抗稀释液。
4. 4°C 孵育过夜。
5. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
6. 将样本放入用抗体稀释缓冲液稀释的荧光染料偶联二抗中，室温避光孵育 1-2 小时。
7. 在 1X PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。
8. 使用带有 DAPI 的封固剂封固载玻片并盖上盖玻片。
9. 为获得最佳效果，请让封固剂在室温下固化过夜。 如需长期保存，请将载玻片平放在 59°C 避光保存。
 
IF
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
 
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
 
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
 
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
 
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
 

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