PSMD2 Antibody [B5P6] Datasheet

生物描述

特异性	PSMD2 Antibody [B5P6] 可检测内源性 PSMD2 总蛋白水平。
背景	PSMD2（又名Rpn1）是26S蛋白酶体19S调节颗粒（RP）盖内的一个非ATPase亚基，在ATP和泛素依赖性降解错误折叠蛋白和调节因子方面发挥着核心支架和泛素受体对接作用，从而确保细胞蛋白质稳态。这种大型蛋白（约950个氨基酸）包含PCI（蛋白酶体-COP9起始）结构域和26S蛋白酶体非ATPase调节亚基结构域，它们共同在RP外周形成一个构象灵活的支架。PSMD2具有多个PCI/MPN结合位点，可促进泛素穿梭蛋白（例如通过UBL结构域的Rad23和Dsk2）和泛素受体（Rpn10和Rpn13）的对接，有效地将泛素化底物定位，以便将其传递给ATPase基环。 PSMD2 协调泛素链的识别及其由盖状结构域相关去泛素化酶 (DUB)（如 Rpn11）介导的重塑。DUB 与 AAA-ATPase 环 (Rpt1-6) 协同作用，展开蛋白质底物，并引导其通过门控 20S 核心 β 亚基进行蛋白水解。因此，26S 蛋白酶体处理约 70% 的细胞内蛋白质，包括细胞周期、细胞凋亡和 MHC I 类抗原呈递的关键调节因子。PSMD2 直接与 TNF 受体的胞内结构域相互作用，从而将蛋白酶体活性与 TNF/NF-κB 信号通路连接起来，并参与免疫调节和炎症反应。PSMD2 过表达与肺腺癌和肝细胞癌的不良预后相关，因为它驱动免疫检查点调控和治疗耐药性。相反，PSMD2 抑制选择性地损害蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样活性，诱导肿瘤细胞凋亡，同时在很大程度上不损伤健康组织。

特异性

PSMD2 Antibody [B5P6] 可检测内源性 PSMD2 总蛋白水平。

背景

PSMD2（又名Rpn1）是26S蛋白酶体19S调节颗粒（RP）盖内的一个非ATPase亚基，在ATP和泛素依赖性降解错误折叠蛋白和调节因子方面发挥着核心支架和泛素受体对接作用，从而确保细胞蛋白质稳态。这种大型蛋白（约950个氨基酸）包含PCI（蛋白酶体-COP9起始）结构域和26S蛋白酶体非ATPase调节亚基结构域，它们共同在RP外周形成一个构象灵活的支架。PSMD2具有多个PCI/MPN结合位点，可促进泛素穿梭蛋白（例如通过UBL结构域的Rad23和Dsk2）和泛素受体（Rpn10和Rpn13）的对接，有效地将泛素化底物定位，以便将其传递给ATPase基环。 PSMD2 协调泛素链的识别及其由盖状结构域相关去泛素化酶 (DUB)（如 Rpn11）介导的重塑。DUB 与 AAA-ATPase 环 (Rpt1-6) 协同作用，展开蛋白质底物，并引导其通过门控 20S 核心 β 亚基进行蛋白水解。因此，26S 蛋白酶体处理约 70% 的细胞内蛋白质，包括细胞周期、细胞凋亡和 MHC I 类抗原呈递的关键调节因子。PSMD2 直接与 TNF 受体的胞内结构域相互作用，从而将蛋白酶体活性与 TNF/NF-κB 信号通路连接起来，并参与免疫调节和炎症反应。PSMD2 过表达与肺腺癌和肝细胞癌的不良预后相关，因为它驱动免疫检查点调控和治疗耐药性。相反，PSMD2 抑制选择性地损害蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样活性，诱导肿瘤细胞凋亡，同时在很大程度上不损伤健康组织。

使用信息

抗体应用

WB

稀释比例

WB

1:1000

反应性

Human, Mouse, Rat, Monkey

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

97 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

PSMD2 Antibody [B5P6]

生物描述

使用信息

文献参考

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