RAF709

目录号：S8690 批次号：S869001

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化学数据

别名

N/A

储存条件
(自收到货起)

3年 / -20°C / 粉状
1年 / -80°C / 溶于溶剂

化学式

C₂₈H₂₉F₃N₄O₄

分子量

542.55

CAS号

1628838-42-5

Solubility (25°C)*

体外

DMSO

100 mg/mL (184.31 mM)

Ethanol

100 mg/mL (184.31 mM)

Water

Insoluble

体内
（现配现用）

均匀悬浊液	CMC-NA	≥5mg/ml	均匀悬浊液可用于口服和腹腔注射。以 1 mL 工作液为例，取 5 mg该产品加到 1 ml CMC-NA 溶液中，混合均匀，即可得工作液浓度为 5 mg/ml的均匀悬浊液。
澄清溶液	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O 该配方已经过Selleck实验室实测。如果上述溶解方案不能满足您的需求，可联系Selleck销售提供定制化测试。	5.000mg/ml (9.22mM)	以 1 mL 工作液为例,取50μL100mg/ml的澄清DMSO储备液加到400μLPEG300中,混合均匀使其澄清;向上述体系中加入50μLTween80,混合均匀使其澄清;然后继续加入500μLddH2O定容至1mL。工作液请现配现用!
澄清溶液	5% DMSO 1 95% Corn oil 该配方已经过Selleck实验室实测。如果上述溶解方案不能满足您的需求，可联系Selleck销售提供定制化测试。	0.800mg/ml (1.47mM)	以1 mL工作液为例，取50μL 16mg/ml的澄清DMSO储备液加到950μL玉米油中，混合均匀。工作液请现配现用！

* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

制备储备液

生物活性

产品描述

RAF709是有效的B/C RAF抑制剂，对C-RAF和B-RAF的IC50值分别为0.4 nM和1.5 nM。它具有高选择性，在浓度为1 μM时，对BRAF, BRAFV600E 和 CRAF的靶向结合率大于99%，而对DDR1、DDR2、FRK和FDGFRβ的脱靶效应非常少。

靶点

C-Raf ^[1] (Cell-free assay)	BRAF(V600E) ^[2] (Cell-free assay)	B-Raf ^[2] (Cell-free assay)
0.4 nM	1 nM	1.5 nM

体外研究

应用快速稀释法检测RAF709的解离速率常数，其离解动力学过程缓慢，T_1/2 > 6.5 h。在Calu-6细胞中，检测pMEK和MEK对RAF709的剂量反应，其EC50分别为0.02和0.1 μM，RAF709抑制其细胞增殖的EC50为0.95 μM。RAF709可稳定BRAF−CRAF二聚体，EC50为0.8 μM。RAF709具有高选择性，在所检测的456种激酶中，1 μM RAF709的靶向效应大于99%（BRAF, BRAFV600E和CRAF）^[1]。RAF709对RAF寡聚物和二聚体具有相等的活性作用。在体外生化检测中，RAF709对BRAF, BRAFV600E和CRAF具有有效的抑制活性，IC50值在0.3-1.5 nM间，在HCT116细胞中，诱导和稳定B/CRAF异源二聚化，但抑制了MEK和ERK磷酸化，抑制RAF二聚体活性。RAF709选择性地抑制了癌基因信号和携有BRAF, NRAS或KRAS突变的肿瘤细胞的增殖^[2]。

体内研究

在携有KRAS突变的移植瘤模型中，RAF709耐受性良好。在不同物种的血浆中37℃孵育3小时，RAF709具有一定的血浆稳定性（在大鼠、小鼠、狗和人类血浆中分别剩余85%、82%、95%和101%）。在各个不同的物种中，血浆蛋白结合率为98%。在药代动力学实验中，RAF709在小鼠和狗中具有中等清除率（分别为35 mL/min/kg和14 mL/min/kg），在大鼠中具有高清除率（50 mL/min/kg）。在小鼠、狗和大鼠中Cmax分别为1 μM、0.5 μM和0.5 μM；在小鼠、大鼠和狗中的口服生物利用度分别为68%、24%和48%。在Calu-6移植瘤小鼠模型中，RAF709的处理将发挥其剂量依赖性的抗肿瘤活性^[1]。

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验	CRAF kinase assay
激酶实验	应用10 nM 显性负突变MEK1蛋白底物（携有K97R突变）、3 μM ATP和10 pM CRAF CRAF Y340E/Y341E开展CRAF激酶实验。reaction buffer包含50 mM Tris pH 7.5, 10 mM MgCl2, 0.05% BSA, 50 mM NaCl, 0.01% Tween-20 和 1 mM DTT。室温下在白色384孔浅口培养板中进行反应，反应体积为10 μL，反应时间为40分钟，每孔加入5 μLquench solution (50 mM Tris pH 7.5, 50 mM EDTA)以终止反应。向反应体系中加入5 μL 显色试剂（50 mM Tris pH 7.5, 0.01% Tween-20, 1:1000稀释的anti-phospho MEK1/2 S217/S221抗体溶液, 0.01 mg/mL each of AlphaScreen Protein A-coated acceptor beads和streptavidin-coated donor bead），室温孵育过夜。利用EnVision plate reader进行检测。在化合物抑制实验中，化合物的检测浓度范围为25 μM-1.74 × 10⁻⁶ μM。DMSO终浓度为0.5%。在加入底物开始反应前，将化合物和CRAF置于一起共同孵育30分钟。
细胞实验	细胞系	HCT116细胞
	浓度	0.1, 1, 10 μM
	处理时间	1小时
	方法	用一定浓度的DMSO或RAF709对HCT116细胞进行处理，处理1小时。通过免疫沉淀BRAF或CRAF检测BRAF/CRAF的二聚化，然后WB分析BRAF和CRAF的表达。细胞溶解产物中的pMER和pERK也通过WB分析检测。
动物实验	动物模型	Calu-6 model (tumor bearing mice)
	剂量	10, 30 或 200 mg/kg.
	给药处理	口服途径

参考文献

RAF709在文献中得到引用

Tumour-selective activity of RAS-GTP inhibition in pancreatic cancer [ Nature, 2024, 629(8013):927-936]	PubMed: 38588697
Identification of a RAS-activating TMEM87A-RASGRF1 fusion in an exceptional responder to sunitinib with non-small cell lung cancer. [ Clin Cancer Res, 2020, 20 pii: clincanres]	PubMed: 32312893
KRASQ61H preferentially signals through MAPK in a RAF dimer-dependent manner in non-small cell lung cancer [ Cancer Res, 2020, canres.0448.2020]	PubMed: 32605999
Depolarization-Dependent C-Raf Signaling Promotes Hyperexcitability and Reduces Opioid Sensitivity of Isolated Nociceptors after Spinal Cord Injury [ J Neurosci, 2020, 40(34):6522-6535]	PubMed: 32690613

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